【摘 要】
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研究目的探讨PP2AC蛋白在大肠癌中的表达及其恶性生物学作用。探讨氨基酸饥饿条件下PP2AC对mTORC1信号通路的作用及调节机制。研究方法1.应用大肠癌组织芯片（Hcol-Ade150CS-01）技术,收集75例大肠癌组织及与其配对的癌旁正常组织,进行免疫组织化学染色,评估大肠癌组织和癌旁正常组织的PP2AC蛋白表达水平（H-Score评分）,统计学分析PP2AC蛋白表达水平与临床病理参数的关系
【基金项目】
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国家自然科学基金（81672354,81572796）； 上海市教委高峰高原计划研究型医师项目（20172017）；
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研究目的探讨PP2AC蛋白在大肠癌中的表达及其恶性生物学作用。探讨氨基酸饥饿条件下PP2AC对mTORC1信号通路的作用及调节机制。研究方法1.应用大肠癌组织芯片（Hcol-Ade150CS-01）技术,收集75例大肠癌组织及与其配对的癌旁正常组织,进行免疫组织化学染色,评估大肠癌组织和癌旁正常组织的PP2AC蛋白表达水平（H-Score评分）,统计学分析PP2AC蛋白表达水平与临床病理参数的关系。通过GEO与TCGA数据库,下载大肠癌芯片PP2AC mRNA数据,并进行统计学分析。2.通过裸鼠皮下移植瘤实验,探讨knockdown（KD）PP2AC对大肠癌移植瘤生长的影响。3.应用western blot等技术研究氨基酸饥饿条件下,过表达以及KD PP2AC对mTORC1信号通路的调节。应用单细胞克隆形成实验和软琼脂集落形成实验,探讨氨基酸饥饿条件下,PP2AC对大肠癌细胞生长和克隆形成能力的影响。4.应用免疫共沉淀和western blot技术探究氨基酸饥饿条件下,PP2AC对c-Myc的调节。应用cycloheximide chase assay探讨氨基酸饥饿下PP2AC对c-Myc蛋白稳定性的影响。构建并转染c-Myc野生型和c-Myc（T58A）突变体质粒,观察氨基酸饥饿条件下PP2AC对c-Myc磷酸化状态的调节。研究结果1.大肠癌组织PP2AC蛋白表达水平明显高于癌旁正常粘膜组织表达水平,并具有统计学差异（P＜0.01）。Meta分析GEO与TCGA数据中所有符合要求的大肠癌mRNA芯片结果,发现大肠癌组织中的PP2AC mRNA表达水平明显高于正常肠粘膜上皮,且具有统计学意义（P＜0.05）。PP2AC mRNA水平与DNA copy number具有显著的相关性（r=0.57,P＜0.01）。PP2AC表达水平与大肠癌较高T分期（P=0.008）、较差的TNM分期（P=0.015）相关。2.与转染空载质粒细胞相比,KD PP2AC明显抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长,并具有统计学差异。3.在氨基酸饥饿条件下,过表达PP2AC明显增强mTORC1通路活性,介导大肠癌细胞抵抗氨基酸饥饿,促进大肠癌细胞的增殖能力和软琼脂克隆形成能力;在氨基酸饥饿条件下,KD PP2AC进一步抑制mTORC1通路活性,抑制大肠癌细胞的增殖能力和软琼脂克隆形成能力。在氨基酸饥饿-回复实验中,过表达PP2AC使大肠癌细胞对氨基酸饥饿后再灌注更加敏感。4.在氨基酸饥饿条件下,PP2AC通过稳定c-Myc,进一步活化mTORC1信号通路,促进大肠癌细胞的增殖生长。KD c-Myc基因,可完全阻断PP2AC过表达所促进的mTORC1活化。过表达PP2AC明显提高c-Myc蛋白半衰期,上调c-Myc蛋白量。PP2AC促进c-Myc（T58）去磷酸化,增加c-Myc（S62）的磷酸化,进而提高c-Myc蛋白稳定性。研究结论PP2AC mRNA和蛋白在大肠癌组织中高表达,与促进大肠癌的生长增殖相关。在氨基酸饥饿条件下,高表达PP2AC通过稳定c-Myc正向调节mTORC1活性,致使大肠癌细胞抵抗氨基酸饥饿,促进大肠癌细胞在氨基酸饥饿的不利环境中生长增殖
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