猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus, PCMV)感染是在易感猪群中引起的一种以胎儿和仔猪死亡、鼻炎、肺炎及生长发育不良、增重差等临床症状为特征的条件性疾病。感染动物范围较窄,仅限于猪。Done于1955年首次于英国分离到本病毒,该病流行呈世界性分布,其中在英国、美国、日本发病率较高,猪群的PCMV血清抗体阳性率都高于90%,说明凡饲养猪只的地区,都可能有本病毒的感染。本实验根据GenBank收录的猪巨细胞病毒(PCMV) gB基因序列,选择序列保守性较好的区域设计了两对引物,分别为gB基因检测引物和gB基因全长引物。对来自江苏扬州、淮安、盐城和海安等地的仔猪的鼻拭子样品进行PCR检测,结果约43.4%(23/53)检测为阳性,用全长引物扩增出全长为2627bp的PCMVgB基因序列,与GenBank已收录的PCMVgB基因的同源性为97.8%-99.4%,编码的氨基酸序列同源性为97.1%-99.3%。应用DNAStar软件进行了进化树分析,结果表明本实验研究毒株与英国株、德国株和我国的湖南株在同一群。并应用DNAStar软件和相关生物信息学网站对gB基因编码的氨基酸序列生物学特性进行了分析,预测出gB基因编码的氨基酸抗原性良好。根据GenBank中已收录的PCMVgB基因序列,选择抗原富集区的两段基因设计两对引物(分别命名为PCMVgB,和PCMVgB2), PCR扩增gB1、 gB2基因,将两目的片段与原核表达载体pGEX-6p-1分别经BamH I和Sal I酶切,重组构建两个表达载体(分别命名为pGEX-gB1和PGEX-gB2),测序结果表明与在GenBank已收录的序列同源性分别为99.4%和100%。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,由SDS-PAGE电泳分析证实gB1和gB2基因获得了表达,蛋白分子量分别约为39KDa和36KDa,分别命名为GST-gB,和GST-gB2.其中重组蛋白GST-gB,以包涵体的形式存在,GST-gB2以可溶性蛋白形式存在。经Western-blot分析证实表达的重组蛋白抗原性良好。GST-gB,用切胶纯化法,GST-gB2通过GSH-Sefinose柱纯化。以纯化的重组蛋白GST-gB2作为诊断抗原建立间接ELISA检测方法。运用方阵试验法确定最适抗原包被浓度为2μg/mL,血清的最佳稀释度为1：100,阳性临界值为0.224,阴性临界值为0.189,建立的ELISA方法的灵敏度为1：3200。