猪蛔虫雌虫cDNA文库的构建、基因筛选与分析

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pigyufish
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪蛔虫病是由猪蛔虫引起的一种感染普遍,流行广泛,危害严重的肠道线虫病。目前,该病的防治主要以药物为主,但由于存在药物残留和耐药性问题,人们试图寻找防控猪蛔虫病的新方法。为此,我们通过对性别基因功能的认识,再用相应的分子生物学技术阻断这些基因的表达,以期达到控制其繁殖发育的目的。某些基因可能仅在某一性别表达,这将成为免疫预防及药物治疗的“关键”分子,为新型疫苗及药物的研制奠定基础。 本研究首先应用SMART技术构建了猪蛔虫雌虫的全长cDNA文库,共获得1.6×106个重组子,重组效率达100%,插入片段长度多在0.4~2kb之间,插入片段平均长度约1.2kb,文库扩增后滴度3×109cfu/mL。后续的筛选工作也证实该文库质量较高。这为今后猪蛔虫雌虫功能基因的研究奠定了基础,提供了材料来源。 随后本研究根据猪蛔虫雌虫特异性ESTs序列,设计引物,用96孔板-PCR排除法对文库进行了筛选,结果共获得了8个阳性克隆,它们代表3个基因。其中5个为全长序列,2个为5端不完全的序列,1个未测序(片段较短)。另外,本研究还从原始文库中随机挑取单克隆,选取插入片断较长的克隆直接测序,共获得2个全长序列和2个5端不完整的序列。所获得的基因序列均己在GenBank注册。 最后,本研究用生物信息学方法对筛选出的全长基因序列和所推测蛋白的基本性质进行了分析,并预测了所推测蛋白的二级结构、三级结构和功能等。结果发现克隆F679-C12-B3、克隆F679-C12-C4、克隆F679-C12-G9的核苷酸序列完全相同,为一个基因或克隆的多个拷贝。克隆F679-D1-F9和以上三个克隆的核苷酸序列和氨基酸序列有一定的差异,可能是一个家族的两个不同成员。它们所编码的蛋白是猪蛔虫免疫抑制卵巢信息蛋白。推测克隆F1042-109所编码的蛋白是脱氧胸苷二磷酸-D-葡萄糖脱水酶。推测克隆F5所编码的蛋白具有C型血凝素的功能。推测克隆F1-63所编码的蛋白为二硫化物异构酶。经在线BLASTx分析,克隆F993-G10-A10与秀丽新杆线虫的卵黄蛋白原的基因序列有较高的相似性。克隆F2-81所编码蛋白的功能可能相似于猪蛔虫免疫抑制卵巢信息蛋白。克隆F1-100与副蛔虫(Parascarisunivalens)的着丝粒和纺锤体相关的蛋白227kDa(PUMA1)有较高的序列相似性。 本研究在国内首次成功地构建了猪蛔虫雌虫的全长cDNA文库,为今后猪蛔虫雌虫的功能基因研究提供了较好的材料来源,从文库中筛选出的几个猪蛔虫雌虫的全长基因序列,并对这些基因进行了分析和功能预测,为今后这些基因的深入研究奠定了基础。
其他文献
摘要:作为高中英语教学的一部分,英语听力教学对于培养高中生的实际英语交际能力起着十分重要的作用。高中英语听力教学要从实际出发,因地制宜,有阶段、有侧重地 循序渐进,逐步提高英语听力理解能力。同时,注意协调好听力与读、写、说的关系,互相促进,达到新课标要求的标准。  关键词:高中英语 听力教学 实践 对策  高中英语听力教学的主要目的是有计划地提高学生的听力理解水平,力求促进学生全面素质的发展并顺利
摘要:本文运用统计分析和问卷调查的研究方法,通过对一所小学的调研,了解目前该校信息化教学的现状,分析并归纳了信息化教学中主要存在的问题,提出了促进信息化教学发展的几点建议。  关键词:小学 信息化教学 个案研究  21世纪是信息时代,在教学中运用信息手段,向学生渗透信息意识,使他们能够更好的适应社会是时代的要求。“计算机要从娃娃抓起”,在小学教学中广泛应用信息化教学对于培养合格人才具有重要的意义。
摘要:在课堂上要让学生自主地参与活动,通过让学生动手做、动脑想、動口说,使学生在活动中发现问题、探索求新,灵活运用知识解决问题,使思维处于活跃状态,不但能使学生克服学习中的障碍,达到理想的教学效果,而且使其思维能力得到充分的锻炼和发展。  关键词:数学课堂 学生思维 评价反馈  著名的数学教育家斯托利亚尔指出:“数学教学是数学思维活动的教学”。通过数学活动营造学习氛围,激起学生饱满的热情和积极的思
锥虫(Trypanosome)能通过不断改变膜表面变异糖蛋白(variable surface glyco- protein,简称 VSG),逃避宿主免疫反应。VSG 是公认的强免疫原,但只能使机体产生针对同型虫体的
鸡球虫种类多、分布广、危害大,临床上往往呈混合感染,其中致病性最强的是柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫。为了研究方便,需寻求一种有效的球虫分离技术。为此,采用了琼脂板法构
本文具体介绍斜井通过软岩地层中采用超前支护短段掘砌的施工方法,以及所采用的施工装备和喷射混凝土支护的经济效果。 This article describes the construction method of
摘要::复习不是旧知识的简单再现和机械重复,关键是要使学生在复习中把旧知识进行转化,并产生新鲜感,努力做到缺有所补、学有所得。把平时相对独立地进行教学的知识,以整理与反思、练习与实践等办法串起来,进而加深学生对知识的理解、沟通。因此,我们必须切实抓好复习工作,真正提高学生应用数学知识解决实际问题的能力。  关键词:小学数学 复习 能力  一、制订切实可行的复习计划  制定复习计划前我们要全面了解学
本试验以猪繁殖-呼吸综合征(PRRSV)国内天津分离株SJ株滴鼻感染10-15日龄PRRSV阴性的健康仔猪,采用免疫组织化学法、RT-PCR和临床学、病理学方法观察PRRSV在仔猪体内靶器官的
摘要:计算教学是小学数学教学的一个重要领域,也是数学教学的根本。在以往的教学中,教师常常通过大量题目来重复训练学生的计算,没能从根本上提高学生的计算能力,使计算教学陷入机械僵硬、枯燥呆板的误区。恰当的情境能唤醒学生的学习热情,促使学生主动参与,从而开动脑筋去寻找解决问题的方法,同时让学生体会到学习计算的乐趣,增强学生学习数学的兴趣。  关键词:小学数学 计算教学 情境创设  一、问题情境的创设从学
鱼类免疫系统的形态和功能的研究正日益受到重视。军曹鱼为世界温、热带海洋水域暖水性鱼类,近年来已经成为中国南方主要的名优海水养殖品种。本文首次利用组织学、组织化学等