丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)是隶属于黄病毒科肝炎病毒属的单股正链RNA病毒，侵入机体后容易诱发慢性感染而发展为肝硬化和肝癌，已成为严重危害人类健康的隐形杀手。HCV感染可以引起细胞内膜结构的改变和重组，形成由许多封闭小泡组成的膜网结构(Membrane Web，MW)，这一结构在病毒复制过程中具有重要作用。HCV在复制过程中需要一系列宿主细胞因子的共同参与，本实验室已经确认磷脂酶PLA2G4C在HCV复制过程中发挥重要作用：PLA2G4C可以和NS4B相互作用，参与病毒诱导的膜网结构形成；PLA2G4C参与病毒组装释放过程。但是NS4B与PLA2G4C相互作用的结构域尚未明确，这个结构域在MW形成中的作用以及NS4B与PLA2G4C的相互作用在病毒包装过程如何发挥作用尚未明了。本文重点解析NS4B与PLA2G4C相互作用的结构域并研究了这一作用区域在病毒复制中的作用;此外构建了PLA2G4C knock-down细胞系，为深入研究PLA2G4C的作用机制提供便利。本研究主要内容包括：　　 第一章为综述部分，对HCV病毒的结构和生活周期进行了简要的概述，重点对HCVNS4B蛋白的结构以及功能进行了较为详细的总结和介绍。磷脂酶PLA2的分类以及在HCV生活周期中的作用也进行了简要介绍。最后阐明了本研究的目的与意义。　　 第二章主要研究了NS4B与PLA2G4C相互作用的区域，并初步验证了这些作用区域对病毒复制的影响。通过构建系列截短和缺失的NS4B克隆，采用免疫荧光和免疫共沉淀的实验手段解析了NS4B与PLA2G4C相互作用的区域，证实NS4B的N端和C端在NS4B与PLA2G4C相互作用中都发挥着一定作用，而AH2和H1结构域发挥主要作用;进一步通过短肽片段过表达发现AH2及H1过表达可以一定程度上干扰NS4B与PLA2G4C的相互作用并抑制了HCV感染和复制。另一方面构建了针对PLA2G4C的酶活和异戊烯化修饰位点的相应突变，发现PLA2G4C的酶活和异戊烯化位点突变不会影响其与NS4B的相互作用，但是异戊烯化突变后会导致PLA2G4C在细胞内定位的变化。　　 第三章的研究主要完成了PLA2G4C knock-down细胞系的构建。通过逆转录病毒体系构建了Huh7.5.1-shNC和Huh7.5.1-shPLA2G4C稳定敲除细胞系，进一步检测了两种细胞系中HCV的复制情况，再次证实PLA2G4C在病毒感染复制过程中发挥重要作用。进一步研究了NS4B在Huh7.5.1-shNC和Huh7.5.1-shPLA2G4C细胞系中的定位，发现在Huh7.5.1-shPLA2G4C细胞系中NS4B绕脂滴环状分布明显减少，提示PLA2G4C在NS4B的绕脂滴定位中发挥重要作用。　　 第四章对NS4B与PLA2G4C相互作用区域进行了系统的研究，并构建了Huh7.5.1-PLA2G4C knock-down细胞系，为后续NS4B和PLA2G4C更深入的研究提供了平台，通过这些研究可以揭示HCV复制中MW形成机制、HCV复制机制等，为抗HCV药物研发和疫苗研究提供帮助。