论文部分内容阅读
目的研究尖叶假龙胆中活性成分龙胆苦苷对人结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响,为后续充分利用尖叶假龙胆抗肿瘤研究提供理论依据。方法1.体外培养结肠癌细胞HCT116,倒置显微镜下观察不同浓度龙胆苦苷作用人结肠癌细胞前后细胞形态学变化;2.CCK-8法检测龙胆苦苷对结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用;3.流式细胞术(FCM)检测药物作用前后细胞周期的改变和凋亡情况;4.JC-1染色FCM分析龙胆苦苷对结肠癌细胞HCT116线粒体膜电位的影响;5.荧光酶标仪检测龙胆苦苷对人结肠癌细胞HCT116活性氧生成的影响。结果1.通过对结肠癌细胞HCT116形态学观察发现,随着龙胆苦苷浓度增加,细胞形态改变显著:结肠癌细胞由多角形逐步变圆,细胞间距变大,细胞浓缩、变小。2.CCK-8法实验结果:不同浓度龙胆苦苷对结肠癌细胞HCT116的生长均有抑制作用。在一定浓度范围内,龙胆苦苷对结肠癌细胞HCT116的抑制作用随浓度增加而加强,当浓度达到50ug/ml时抑制作用达到平台。同时,可以看到,龙胆苦苷对结肠癌细胞HCT116的抑制作用从药物作用24h后效果明显,48h后达到平台期。3.细胞周期分析:24h处理的细胞可以发现龙胆苦苷可明显的阻滞细胞周期于G2/M期,且比例随着给药浓度的增加而增加,说明龙胆苦苷可将肿瘤细胞抑制在G2/M期。4.通过Annexin V-FITC/PI 荧光双染法验证,龙胆苦苷可体外诱导结肠癌细胞HCT116凋亡。不同浓度龙胆苦苷24小时处理的细胞凋亡率结果:空白对照组的凋亡率为2.38%±0.43;6.25 ug/ml龙胆苦苷处理组的凋亡率为 8.02%±1.05;12.50 ug/ml龙胆苦苷处理组的细胞凋亡率为14.05%±1.35;25 ug/ml龙胆苦苷处理组的细胞凋亡率为21.08%±2.32;50 ug/ml龙胆苦苷处理组的细胞凋亡率为39.82%±3.76。5.龙胆苦苷可明显降低HCT116结肠癌细胞线粒体膜电位。JC-1探针标记FCM分析细胞内线粒体膜电位结果表明,不同浓度龙胆苦苷作用细胞24h后,与空白对照组相比,线粒体膜电位水平均不同程度下降,且与药物浓度成剂量依赖关系。6.荧光酶标仪对细胞内活性氧测定结果显示:不同浓度龙胆苦苷作用于HCT 116细胞24h与48h后,其活性氧水平较空白组细胞内活性氧水平均明显升高。P<0.05,差异具有统计学意义。结论1.龙胆苦苷能够抑制HCT116细胞增殖且能诱导其凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。2.龙胆苦苷诱导细胞凋亡可能与激活线粒体凋亡、促进细胞内活性氧生成有关。