【摘 要】
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[目的]本研究将探讨miR-99a-3p和NCAPG在SLE患者外周血B细胞中的表达情况以及miR-99a-3p对NCAPG、PI3K/AKT通路和B细胞增殖周期凋亡的影响。[方法]1.利用实时定量PCR（RT-qPCR）分析SLE患者和正常对照外周血B细胞中miR-99a-3p和NCAPG的表达情况。2.利用miR-99a-3p激动剂和抑制剂处理B细胞系Ball-1。运用RT-qPCR和West
【基金项目】
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国家自然科学基金（40118088）； 昆明医科大学研究生创新基金（硕士），课题名称:miR-99a-3p在汉族SLE患者中的表达及临床相关性和机制研究，起止时间:2021年05月-2022年05月，项目批准时间:2021年05月，项目编号:2021S053；
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[目的]本研究将探讨miR-99a-3p和NCAPG在SLE患者外周血B细胞中的表达情况以及miR-99a-3p对NCAPG、PI3K/AKT通路和B细胞增殖周期凋亡的影响。[方法]1.利用实时定量PCR（RT-qPCR）分析SLE患者和正常对照外周血B细胞中miR-99a-3p和NCAPG的表达情况。2.利用miR-99a-3p激动剂和抑制剂处理B细胞系Ball-1。运用RT-qPCR和Western blotting检测miR-99a-3p对其靶基因NCAPG表达的影响,Western blotting检测miR-99a-3p对PI3K/AKT通路激活的影响,CCK-8法酶标仪分析miR-99a-3p对Ball-1细胞增殖的影响,流式细胞仪分析miR-99a-3p对Ball-1细胞周期、细胞凋亡的影响。3.利用miR-99a-3p抑制剂和siNCAPG同时处理Ball-1细胞系以及利用miR-99a-3p抑制剂和PI3K/AKT通路抑制剂LY294004同时处理Ball-1细胞系进行回复实验,检测miR-99a-3p和NCAPG mRNA水平的表达情况、NCAPG蛋白和PI3K/AKT通路蛋白的表达情况以及Ball-1细胞的增殖周期凋亡情况。[结果]1.miR-99a-3p在SLE患者外周血B细胞中的表达比正常对照低（P=0.005）,而 NCAPG 的表达比正常对照高（P＜0.001）。2.抑制 miR-99a-3p的表达可以促进NCAPG的表达和PI3K/AKT通路的激活（P＜0.05）,同时也可以抑制B细胞的凋亡（P＜0.05）,促进B细胞进入S期（P＜0.05）,细胞增殖能力增强（P＜0.05）;反之亦然。3.同时抑制miR-99a-3p和NCAPG的表达可以削弱单独抑制miR-99a-3p表达所介导的下游效应（P＜0.05）。4.抑制NCAPG表达的同时抑制miR-99a-3p的表达可以部分回复单独抑制NCAPG所介导的PI3K/AKT通路抑制（P＜0.05）,细胞凋亡增加（P＜0.05）、S期细胞比例下降（P＜0.05）、细胞增殖减少的效应（P＜0.05）。4.同时抑制miR-99a-3p表达和PI3K/AKT通路可以部分削弱单独抑制miR-99a-3p或单独抑制PI3K/AKT通路所介导的细胞增殖周期凋亡变化的效应（P＜0.05）。[结论]miR-99a-3p在SLE患者外周血B细胞中表达降低,且负向调控其靶基因NCAPG的表达和PI3K/AKT通路的激活;miR-99a-3p可以通过NCAPG和PI3K/AKT通路对B细胞的数量进行负调控,这种负调控效应可能是通过促进B细胞凋亡和改变其周期进程实现的。
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