亲水作用色谱自上世纪九十年代提出以来,发展迅速,展现出独特的优越性和巨大的潜力,为强极性和亲水性化合物的分离分析提供了新的技术支持。本文从亲水作用色谱填料的开发研究入手,结合亚微米色谱基质和加压毛细管电色谱平台,建立了极性化合物和亲水性化合物的高效快速分离方法,丰富了亲水作用色谱的研究与应用。本论文共分为五个章节。第一章对毛细管电色谱、加压毛细管电色谱、亚微米毛细管电色谱填料、亲水作用色谱和“巯基-烯”点击化学做了概述,并对毛细管电色谱中的双电层、电渗流、电泳和滑流现象等做了介绍。第二章主要考察反应温度、搅拌速度和反应时间对亚微米色谱介质合成结果的影响,通过对反应条件的选择和优化,确定了不同粒径大小的SiO₂微球合成方法,最终合成了382±6 nm、421±3 nm、577±6 nm、615±3 nm和856±12 nm等多种规格的SiO₂微球,扫描电镜图（SEM）显示合成的微球表面光滑、粒径均匀且单分散。反应温度和搅拌速度对改良St?ber法合成的粒径大小影响显著;采用溶胶种子法合成SiO₂微球时,延长第一步种子母核的反应时间能显著增加SiO₂微球大小。第三章通过“巯基-烯”点击化学,对800 nm SiO₂微球表面进行半胱氨酸功能基团的修饰,合成了800 nm亲水作用色谱填料Cys-VTMS-SiO₂,实验选择苯酚、邻苯二酚和间苯三酚三种物质为分离对象,考察了施加电压、缓冲盐浓度、缓冲液pH对800 nmCys-VTMS-SiO₂色谱柱分离效果的影响,并对碱基类和胺类化合物进行分离分析,与后续合成的580 nm Cys-VTMS-SiO₂色谱柱进行对比。第四章对580 nm SiO₂微球表面进行半胱氨酸功能基团修饰,合成了580 nm Cys-VTMS-SiO₂色谱填料,实验选择丙烯酰胺和硫脲为分离对象,考察580 nm Cys-VTMS-SiO₂色谱柱的亲水作用分离机理。以cLC和pCEC两种分离模式为平台,通过研究施加电压、缓冲盐浓度、缓冲液pH和泵流速等反应条件对甲苯、丙烯酰胺和硫脲分离结果的影响,考察合成的580 nm Cys-VTMS-SiO₂亲水色谱柱的分离性能,并最终实现了核苷类、酚类、胺类和多肽类化合物的分离。重现性考察结果表明,甲苯、丙烯酰胺和硫脲三种物质的日内、日间和批间重现性的RSD值均小于2%,说明该柱分离重现性良好且色谱柱制备方法重现性佳。第五章利用“巯基-烯”点击化学技术,对580 nm SiO₂微球表面进行谷胱甘肽功能基团的修饰,合成了580 nm GSH-VTMS-SiO₂色谱填料,为考察该亲水作用色谱柱的性能,将苯酚、水杨酸、苯甲酸和3,4-二羟基苯甲酸4种酚酸类化合物作为分离物质,以pCEC为平台,对电压、缓冲盐浓度和缓冲液pH进行条件优化,实现酚酸类化合物的分离,为亚微米级新型亲水型色谱固定相（GSH-VTMS-SiO₂）的应用与开发提供方法支持。第六章对此项目合成的两种新型亲水作用色谱进行总结,并对下一步可能的研究方向进行展望。