第一部分核酸适配体LW-25在胃癌组织切片上的应用检测及临床分析背景近些年随着人们对核酸适配体的深入研究,越来越多的肿瘤细胞的核酸适配体被发现,这些核酸适配体可以特异性的识别其对应的肿瘤细胞,然而这些适配体大多只能在特定的实验室环境去和其靶细胞结合,没有真正应用于临床研究,本文旨在利用已经筛选得到的可以特异性识别高转移性胃癌细HGC-27但不识别没有转移能力的胃癌细胞的核酸适配体LW-25,研究其与胃癌病理组织切片的结合能力并进行相关的临床分析。目的利用合成的高转移胃癌细胞HGC-27的适配体LW-25,研究其与临床病理组织切片的结合能力并进行相关的临床分析。方法合成高转移性胃癌细胞HGC-27的核酸适配体LW-25。然后对其进行荧光修饰,最后将适配体LW-25分别于胃癌组织切片孵育,利用共聚焦显微镜观察其结合结果并结合临床资料分析。结果1.核酸适配体LW-25对发生淋巴结转移的胃癌组织切片识别率要远大于无淋巴结转移的胃癌组织切片。2.适配体LW-25与发生淋巴结转移的胃癌切片孵育时,染色阴性(假阴性)的患者其组织病理学分化程度比真阳性的患者要高,TNM分期要低。3.适配体LW-25与无淋巴结转移的胃癌切片孵育时,染色阳性(假阳性)的患者其组织病理学分化程度比真阴性的患者要差,TNM分期要高。结论1.适配体LW-25可以特异性识别已经发生淋巴结转移的胃癌病理切片。2.适配体LW-25识别发生淋巴结转移的胃癌切片的准确性可能和胃癌组织的组织病理学分化程度及TNM分期有关。3.适配体LW-25拥有预测胃癌淋巴结转移的潜能。第二部分人高转移胃癌细胞HGC-27适配体靶标蛋白的发现背景胃癌是世界上四大最常见的恶性肿瘤之一,发病率呈逐年上升的趋势,但是大多数胃癌患者的早期症状很不明显,结果导致大部分胃癌患者在就诊时就已发生癌细胞的转移,这无疑延误了肿瘤治疗的最佳时机。目前医学对于胃癌的早期转移仍然缺少高效的检测手段。因此如果能够鉴定出高转移性胃癌细胞的肿瘤标志物将对于早期监测胃癌的转移和理解胃癌如何进展带来巨大前景。适配体近些年来在临床肿瘤诊断与治疗领域已经成为研究热点,本文旨在利用已经得到的可以特异性识别高转移胃癌细胞HGC-27名为LW-25的核酸适配体去发现其特异性结合的肿瘤标志物。目的利用cell-SELEX技术在体外筛选得到的能够特异性识别高转移性胃癌细胞HGC-27的核酸适配体LW-25,探索其与高转移胃癌细胞HGC-27结合的靶标蛋白。方法合成筛选成功可以特异性的识别高转移性胃癌细胞HGC-27但不识别没有转移能力的胃癌细胞AGS的核酸适配体LW-25。首先,利用胰蛋白酶消化细胞的方法来确定适配体结合的靶标类型是蛋白质,然后通过裂解细胞来提取出胃癌细胞中的蛋白质。用核酸适配体介导的亲和富集实验分离出高转移胃癌细胞HGC-27结合的蛋白,继而进行电泳分离蛋白,找出差异条带即为潜在靶标蛋白所在的条带。最后将分离后的差异条带送予质谱分析,进而通过分析比对质谱结果判定潜在的靶标蛋白。结果1.核酸适配体LW-25与高转移胃癌细胞HGC-27结合的位点为蛋白质。2.SDS-PAGE电泳成功找出差异条带,经质谱分析比对,NONO蛋白是最明显的差异蛋白。结论本研究利用通过cell-SELEX技术成功筛选出的能特异性识别出识别高转移胃癌细胞HGC27的适配体,首先鉴定出靶点类型为蛋白质,后进一步分析出NONO蛋白是LW-25潜在的靶标蛋白并很可能是引起胃癌转移的重要蛋白。为今后早期监测胃癌转移和探索胃癌转移发生发展机制带来巨大前景。