疟疾是一种通过蚊媒传播的传染性寄生虫病,在世界多国造成上亿的感染病例和数十万的死亡病例。疟原虫作为低等单细胞生物,存在有性生殖和无性生殖两种生殖方式。而细胞骨架蛋白在疟原虫各个生活时期均有表达,是潜在的抗疟靶点。少数疟原虫无性期细胞会有性生殖阶段的雌雄配子体,该细胞进入按蚊体内后受到刺激会发生激活,形成雌雄配子。雄配子体激活的标志为鞭毛丝的组装和伸出,此过程涉及微管的组装。尽管已有文献报道微管蛋白结合辅助因子A(TBCA)参与微管的组装,但仍没有直接证据证明TBCA蛋白与疟原虫雄配子体的激活有关。本课题基于对基因tbca的功能分析,揭示了TBCA蛋白参与雄配子体激活过程。首先将约氏疟原虫TBCA蛋白与不同种类疟原虫进行多序列比对后发现其存在一个保守的TBCA domain。我构建了tbca基因内源加标签虫株,对TBCA蛋白进行全生活周期的表达分析,显示该蛋白在疟原虫的全生活周期中均有表达,且在配子体时期与Tubulin α或者是β蛋白呈现出部分共定位情况。通过三次独立敲除获得三个tbca敲除单克隆虫株,结果表明,tbca敲除的疟原虫不能经蚊媒在全新的健康小鼠上建立疟疾的感染,并且通过回补约氏疟原虫tbca基因可回复表型缺陷。进一步的实验表明,基因tbca敲除导致雄配子体出丝率较之野生型雄配子体出丝率显著下,且并非出丝延迟,而是出丝阻滞。免疫荧光结果表明tbca基因的敲除不影响配子体激活时破裂红细胞膜和疟原虫囊膜的能力。通过蚊传杂交实验和免疫荧光标记激活后的雌配子体P28蛋白表达实验,验证tbca敲除后造成的表型缺陷为单雄配子体缺陷造成,雌配子体功能正常。本论文的工作以约氏疟原虫17XNL为模型,运用CRISPR/Cas9系统对TBCA进行研究,考察其在配子体激活时的作用,并尝试揭示该蛋白与微管蛋白之间的相互关系。本研究为进一步研究TBCA蛋白打下基础,并为抗疟靶点的药物研发提供了新靶点。