【摘 要】
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目的:1,研究单纯低频超声辐照对大鼠后肢血管通透性的影响。2,研究低频超声辐照联合微泡造影剂(Sono Vue)对大鼠后肢血管通透性的影响。3,研究超声辐照对内皮细胞活性的影响。4,研究超声辐照对体外内皮细胞屏障模型通透性和紧密连接ZO-1蛋白的影响。方法:1,72只清洁级SD雄性大鼠随机分为9组,每组8只大鼠,分别为空白组、2.5min组、5min组、10min组、20min组、30min组、4
【基金项目】
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上海交通大学医工交叉研究基金:治疗性超声波改善动脉粥样硬化介入术后再狭窄的分子机制探讨,项目编号:YG2015MS55;
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目的:1,研究单纯低频超声辐照对大鼠后肢血管通透性的影响。2,研究低频超声辐照联合微泡造影剂(Sono Vue)对大鼠后肢血管通透性的影响。3,研究超声辐照对内皮细胞活性的影响。4,研究超声辐照对体外内皮细胞屏障模型通透性和紧密连接ZO-1蛋白的影响。方法:1,72只清洁级SD雄性大鼠随机分为9组,每组8只大鼠,分别为空白组、2.5min组、5min组、10min组、20min组、30min组、40min组、60min组和120min组,其中8个时间组为单纯超声辐照亚组,分组依据为超声辐照与伊文思蓝注射所间隔的时间。检测伊文思蓝的外渗含量对大鼠肢体血管的通透性进行定量分析。每组随机选取2只大鼠行组织样本的苏木精-伊红染色。2,80只清洁级SD雄性大鼠随机分为8组,每组10只大鼠,分别为空白组、单纯微泡组、2.5min组、5min组、10min组、20min组、30min组和60min组,其中6个时间组为微泡+超声亚组,分组依据为超声辐照与伊文思蓝注射所间隔的时间。检测伊文思蓝(Evans Blue,EB)的外渗含量对大鼠后肢的血管通透性进行定量分析。每组随机选取2只大鼠分别行透射电镜检测和苏木精-伊红染色。3,HUVECs细胞经超声辐照后通过MTS实验检测单纯超声或微泡联合超声辐照对细胞活力的影响。4,单纯超声实验和微泡联合超声实验均设置一系列时间组,包括0.5H、1H、2H、4H、8H和24H组,分组依据为超声辐照与实验检测所间隔的时间。通过MTS实验和LDH实验评价超声辐照对HUVECs细胞活力的影响。通过FITC-Dextran的跨膜实验评价超声辐照对内皮细胞屏障通透性的影响。通过蛋白印记和免疫荧光实验检测超声辐照对HUVECs细胞内紧密连接蛋白ZO-1表达和分布的影响。结果:1,单纯低频超声辐照能够改变大鼠肢体血管的通透性。血管通透性于超声辐照30min后显著增强,而于超声辐照120min后通透性恢复至正常状态。单纯超声辐照对超声作用区域的血管和肌肉组织无损伤。2,微泡联合低频超声辐照能够改变大鼠肢体血管的通透性。通透性增强的最佳时间窗为超声辐照后30min内,而在超声辐照1h后血管通透性恢复至正常状态。HE切片观察未见超声辐照区域内的血管和肌肉组织损伤。超声辐照联合微泡能够打开动脉内皮细胞间紧密连接结构。3,单纯低频超声辐照对HUVECs细胞的增殖有轻度抑制作用,但随着超声声压的增加和辐照时间的延长,细胞的生存率未受到显著影响。微泡联合超声辐照对HUVECs细胞的增殖存在显著的抑制作用,随着辐照时间的延长和微泡浓度的增加,细胞的生存率显著降低。但超声声压增加未对细胞的生存率产生显著影响。最佳的超声辐照条件是声压为0.4MPa的500k Hz超声辐照1min,最适微泡造影剂浓度为20%。4,在一定条件下,单纯超声和微泡联合超声辐照均对细胞无显著损伤。单纯超声和微泡联合超声辐照能够可逆的改变内皮细胞屏障的通透性。两种超声辐照方式均不改变ZO-1蛋白在细胞内的表达,但改变ZO-1蛋白在细胞膜上的分布。结论:1,单纯低频超声辐照能够导致大鼠后肢血管通透性发生延迟增强,且通透性的改变为安全可逆的。2,微泡联合低频超声辐照能够安全可逆的改变大鼠后肢血管的通透性。3,单纯低频超声辐照对HUVECs细胞的增殖无显著的抑制作用。微泡联合超声辐照对HUVECs细胞的增殖存在显著的抑制作用,随着辐照时间延长和微泡浓度增加,HUVECs细胞的生存率显著降低。最佳超声辐照条件是声压为0.4MPa的500k Hz超声辐照1min,最适的微泡浓度为20%。4,单纯超声和微泡联合超声辐照均能够安全可逆的改变内皮细胞屏障的通透性,其潜在的分子机制与ZO-1蛋白在细胞膜上的分布变化相关。
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