【摘 要】
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目的急性T淋巴细胞白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL）恶性程度高,临床进展快,常规化疗缓解后易复发,患者中60%～70%存在NOTCH1活化型突变。目前,以Notch1信号通路为靶点的γ-分泌酶抑制剂应用效果不佳。组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）参与Notch1信号通路对下游基因的调控,其抑制剂在其他肿瘤中
【基金项目】
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国家自然科学青年基金项目（81300405）；
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目的急性T淋巴细胞白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL）恶性程度高,临床进展快,常规化疗缓解后易复发,患者中60%～70%存在NOTCH1活化型突变。目前,以Notch1信号通路为靶点的γ-分泌酶抑制剂应用效果不佳。组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）参与Notch1信号通路对下游基因的调控,其抑制剂在其他肿瘤中已有成功的治疗经验,有望成为T-ALL新的治疗选择。本课题拟利用Oncomine数据库分析T-ALL中不同HDAC亚型的表达情况,探讨广谱型和Ⅰ类选择型HDAC抑制剂（HDAC inhibitor,HDACi）分别对不同NOTCH1表达量T-ALL细胞株的作用及机制研究,为T-ALL的表观遗传学机制治疗提供临床前研究数据。方法1.通过Oncomine数据库收集T-ALL不同HDAC亚型表达情况的转录组芯片数据;2.采用PCR和RT-q PCR法筛选常见TALL细胞株中NOTCH1表达量及其HDAC各亚型表达基线水平;3.CCK-8法测定广谱型HDACi帕比司他和Ⅰ类选择型HDACi西达本胺分别对不同NOTCH1表达量的T-ALL细胞增殖的影响;4.流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;5.Western Blot检测组蛋白H3K9乙酰化、凋亡、Notch1信号通路、C-MYC等蛋白变化。结果1.Oncomine数据库中T-ALL患者高表达Ⅰ类和Ⅱ类HDACs;2.不表达NOTCH1的THP-1细胞株和NOTCH1高表达T-ALL细胞株Molt-4中主要表达Ⅰ类和Ⅱ类HDACs;NOTCH1低表达T-ALL细胞株A3中主要表达Ⅰ类和Ⅱa类HDACs;各细胞株中个各HDAC亚型表达量不同;3.帕比司他和西达本胺均呈时间-浓度依赖的方式抑制A3和Molt-4细胞增殖,并可诱导细胞凋亡和G1期细胞周期阻滞;且帕比司他诱导THP-1细胞凋亡和周期阻滞的有效浓度约为A3和Molt-4细胞的10倍;4.帕比司他和西达本胺均可上调A3及Molt-4细胞组蛋白H3K9乙酰化水平,帕比司他在低浓度即可下调T-ALL细胞株中ICN1及C-MYC蛋白,西达本胺对此作用不明显,但可调控凋亡相关蛋白,显著下调p-ERK1/2蛋白水平。结论1.与不表达NOTCH1的THP-1细胞相比,广谱型HDACi帕比司他对表达NOTCH1的T-ALL细胞株A3和Molt-4作用敏感,低浓度即可有效抑制两株细胞增殖,诱导凋亡和G1期细胞周期阻滞;机制可能与同时作用于组蛋白H3K9和非组蛋白底物C-MYC,抑制Notch1信号通路激活有关;2.Ⅰ类选择型HDACi西达本胺能有效抑制A3和Molt-4细胞增殖,增加组蛋白H3K9乙酰化水平,但抑制Notch1信号通路激活的作用不明显;其可通过激活线粒体途径诱导A3和Molt-4细胞凋亡,其抗白血病机制可能与抑制ERK/MAPK信号通路转导有关。
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