论文部分内容阅读
背景与目的:骨质疏松症作为一种常见病和多发病,困扰人类健康已许久,近年来,关于本病的研究也日趋深入。骨质疏松症是由骨吸收与骨形成之间动态平衡失调所致,目前,治疗骨质疏松的药物日益具有靶向性,抗骨质疏松药物研发也由细胞水平发展至信号通路水平,为骨质疏松精确治疗开辟了新路途。本研究通过飞天蜈蚣七、珠子参干预成骨细胞,观察两药对成骨细胞的作用,并通过蛋白表达来揭示飞天蜈蚣七和珠子参对抗骨质疏松的机制。
方法:1.取材于出生2~3d乳鼠颅骨,以含20%胎牛血清的MEM培养液进行培养,采用胶原酶消化法分离成骨细胞,并进行细胞接种与传代,待成骨细胞长满培养瓶,分别铺就96、24、6孔板,然后用飞天蜈蚣七和珠子参不同浓度药物及配比干预各板中成骨细胞的生长,培养数天后,再分别采取MTT法测定成骨细胞活力,EDU法测定成骨细胞增殖,试剂盒测定成骨细胞碱性磷酸酶,钙化结节染色测定成骨细胞成骨能力。2.收集飞天蜈蚣七和珠子参不同浓度药物及配比干预下成骨细胞的蛋白样品,用BCA法给蛋白定量,为随后Westernblot实验做准备,即电泳、电转、封闭、孵育一抗、洗涤一抗、孵育二抗、洗涤二抗、化学发光、分析结果,按顺序依次完成。
结果:1.珠子参在80~160mg/L的浓度范围内显著促进成骨细胞增殖,飞天蜈蚣七在测定浓度范围内对成骨细胞增殖无显著性差异;2.珠子参、飞天蜈蚣七在一定浓度范围内显著促进成骨细胞碱性磷酸酶的表达;3.珠子参、飞天蜈蚣七在一定浓度范围内显著提高无血清培养基培养的成骨细胞活力,减少成骨细胞凋亡,4.飞天蜈蚣七和珠子参的不同配比皆可促进成骨细胞碱性磷酸酶的表达,而当配比为1∶2时效果最佳;5.飞天蜈蚣七和珠子参为1∶2时,对成骨细胞增殖具有协同促进作用;6.飞天蜈蚣七和珠子参都可以提高成骨细胞的β-catenin,Wnt和BMP2的蛋白表达,并且存在协同促进作用。
结论:1.飞天蜈蚣七对成骨细胞增殖无显著作用,而珠子参可促进成骨细胞增殖;2.飞天蜈蚣七和珠子参都可促进成骨细胞碱性磷酸酶表达,增加成骨细胞活力;3.飞天蜈蚣七和珠子参具有协同作用,而当配比为1∶2时,作用最佳;4.飞天蜈蚣七和珠子参通过BMP2和Wnt/β-catenin信号通路协同促进成骨。
方法:1.取材于出生2~3d乳鼠颅骨,以含20%胎牛血清的MEM培养液进行培养,采用胶原酶消化法分离成骨细胞,并进行细胞接种与传代,待成骨细胞长满培养瓶,分别铺就96、24、6孔板,然后用飞天蜈蚣七和珠子参不同浓度药物及配比干预各板中成骨细胞的生长,培养数天后,再分别采取MTT法测定成骨细胞活力,EDU法测定成骨细胞增殖,试剂盒测定成骨细胞碱性磷酸酶,钙化结节染色测定成骨细胞成骨能力。2.收集飞天蜈蚣七和珠子参不同浓度药物及配比干预下成骨细胞的蛋白样品,用BCA法给蛋白定量,为随后Westernblot实验做准备,即电泳、电转、封闭、孵育一抗、洗涤一抗、孵育二抗、洗涤二抗、化学发光、分析结果,按顺序依次完成。
结果:1.珠子参在80~160mg/L的浓度范围内显著促进成骨细胞增殖,飞天蜈蚣七在测定浓度范围内对成骨细胞增殖无显著性差异;2.珠子参、飞天蜈蚣七在一定浓度范围内显著促进成骨细胞碱性磷酸酶的表达;3.珠子参、飞天蜈蚣七在一定浓度范围内显著提高无血清培养基培养的成骨细胞活力,减少成骨细胞凋亡,4.飞天蜈蚣七和珠子参的不同配比皆可促进成骨细胞碱性磷酸酶的表达,而当配比为1∶2时效果最佳;5.飞天蜈蚣七和珠子参为1∶2时,对成骨细胞增殖具有协同促进作用;6.飞天蜈蚣七和珠子参都可以提高成骨细胞的β-catenin,Wnt和BMP2的蛋白表达,并且存在协同促进作用。
结论:1.飞天蜈蚣七对成骨细胞增殖无显著作用,而珠子参可促进成骨细胞增殖;2.飞天蜈蚣七和珠子参都可促进成骨细胞碱性磷酸酶表达,增加成骨细胞活力;3.飞天蜈蚣七和珠子参具有协同作用,而当配比为1∶2时,作用最佳;4.飞天蜈蚣七和珠子参通过BMP2和Wnt/β-catenin信号通路协同促进成骨。