目的1、通过对安徽中医药大学第一附属医院近10年明确诊断为支气管哮喘的240例住院患者临床疗效回顾性调查,分别从总体疗效、临床症状改善状况、肺功能及炎症性相关指标的变化方面比较分析西医与中西医治疗哮喘的作用效果,探讨中医药在支气管哮喘治疗中的优势所在,为优化支气管哮喘的临床治疗提供参考。2、通过观察阳和平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织病理学、气道黏液分泌、肺功能及血清中IL-17、TNF-α和IFN-g、肺泡灌洗液中MUC5AC和MUC5B以及肺组织AQP1和AQP5 m RNA和蛋白表达的影响,探讨阳和平喘颗粒治疗支气管哮喘的作用机制,为进一步揭示阳和平喘颗粒“温阳补肾,宣肺平喘”的作用机制提供实验依据。方法1、通过查阅相关文献资料并加以完善,制定支气管哮喘(哮病)中医证候及诊疗回顾性调查表和临床症状评分标准表,分别从一般资料(性别、年龄、病程分布)及治疗的总体疗效、临床症状改善状况、肺功能及炎症性相关指标的变化情况等方面进行比较分析,总结归纳出中医药在支气管哮喘治疗中的优势所在。2、将120只SD大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、低、中、高剂量阳和平喘颗粒治疗组和地塞米松治疗组,每组20只。采用OVA腹腔注射致敏和雾化吸入激发的方法建立大鼠哮喘模型,具体方法为:除正常组外,其余各组分别在实验的第1天和第7天采取腹腔三点注射法注射浓度为10%的OVA溶液1m L(腹腔注射0.5m L,两侧腹股沟各注射0.25m L)致敏大鼠。致敏结束后,将大鼠置于雾化箱中雾化吸入浓度为1%的OVA进行激发,每次15min,1次/天,连续激发14天。在哮喘模型的基础上,采用腹腔两点注射法(左右各0.5m L)注射浓度为1mg/m L氢化可的松复制肾阳虚模型。同时,正常组则使用相同剂量的生理盐水按相同操作进行处理。第28天开始,低、中、高剂量阳和平喘颗粒治疗组分别按1.62、3.24和6.48g/kg的剂量标准进行灌胃给药,地塞米松治疗组按0.5mg/kg的标准进行灌胃给药,1次/天,连续给药14天。同时,正常组和模型组则使用相同剂量的生理盐水灌胃相同时间。末次激发后24h,使用6%水合氯醛腹腔注射麻醉,肺功能检测仪进行肺功能检测;HE、AB-PAS染色检测肺组织病理改变及黏蛋白分泌情况;ELISA检测血清中IL-17、TNF-a和IFN-g及肺泡灌洗液中MUC5AC和MUC5B的表达;Real-time PCR、Western blot和免疫组化分别检测AQP1和AQP5在肺组织中的表达强度和分布变化。结果1、通过对240例哮喘患者数据资料的比较分析,结果表明两组患者治疗前的性别构成、年龄分布和病程分布均无统计学差异,具有可比性;治疗后比较分析表明,西医与中西医治疗均可显著改善哮喘患者的临床症状(喘促、咳嗽、咳痰、胸闷和哮鸣音),提高哮喘患者肺功能FEV1、FEV1%和PEF(P<0.01),降低患者血清中白细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和CRP的含量(P<0.01),总体有效率分别为88.3%和97.5%。与西医治疗相比,中西医治疗在改善临床症状和提高患者肺功能方面效果较为显著(P<0.05),具有明显优势。2、肺功能检测结果表明,与正常组相比,模型组大鼠肺功能指标FVC、FEV1、FEV1/FVC和PEF均显著下降(P<0.01);与模型组相比,低、中、高剂量阳和平喘颗粒治疗组大鼠肺功能均不同程度的提高(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。3、HE染色结果显示,正常组大鼠肺组织气道结构完整、肺泡及管腔形态、大小均正常,无炎性、增生等病理学表现;模型组大鼠肺组织内存在大量炎症性细胞浸润,其中以嗜酸性粒细胞片状浸润为主,气道壁基底层增厚、气道壁断裂、气道狭窄、肺泡腔增大;各治疗组大鼠肺组织形态结构均明显改善、气道管腔大小明显恢复,气道内炎性细胞浸润程度显著降低。4、AB-PAS染色结果显示,正常组大鼠肺泡及气道内仅有少量的黏蛋白;模型组大鼠肺泡及气道内存在大量的黏蛋白,主要为中性蛋白和糖蛋白,且呈团块状聚集;与模型组相比,低、中、高剂量阳和平喘颗粒治疗组大鼠肺泡及气道内黏蛋白分泌均明显降低。5、ELISA检测结果表明,与正常组相比,模型组大鼠血清中IL-17、TNF-α含量,肺泡灌洗液中MUC5AC和MUC5B显著均显著升高(P<0.01),血清中IFN-g含量明显降低(P<0.01);与模型组相比,低、中、高剂量阳和平喘颗粒治疗组大鼠血清中IL-17、TNF-α以及肺泡灌洗液中MUC5AC和MUC5B均明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),血清中IFN-g明显升高(P<0.01),并且阳和平喘颗粒对IFN-g的作用效果优于地塞米松(P<0.01)。6、Real-time PCR和Western blot结果表明,与正常组相比,模型组大鼠肺组织中AQP1和AQP5 m RNA和蛋白表达水平均发生显著下降(P<0.01);与模型组相比,低、中、高阳和平喘颗粒治疗组AQP1和AQP5 m RNA和蛋白表达水平均显著上升(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。7、免疫组化结果显示,AQP1主要分布于呼吸道旁毛细血管内皮细胞顶膜面、肺泡Ⅱ型细胞顶膜面和气道上皮细胞等部位;AQP5主要分布于Ⅰ型肺泡上皮细胞的顶膜面和支气管上皮细胞的腔膜面等部位。同时,与正常组相比,模型组大鼠肺组织表达AQP1和AQP5的阳性细胞数量和表达强度均发生显著下降,平均光密度值明显降低(P<0.01);与模型组相比,低、中、高剂量阳和平喘颗粒治疗组大鼠肺组织表达AQP1和AQP5的阳性细胞数量和表达强度均明显恢复,平均光密度值显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论1、西医与中西医治疗均可通过降低炎症反应、提高肺功能和改善临床症状,进而达到治疗哮喘的效果。同时,中西医治疗在总体疗效、改善患者肺功能和临床症状方面具有明显的优势,体现了中医药在哮喘治疗当中具有独特效果,为优化哮喘的临床治疗奠定了基础。2、阳和平喘颗粒可通过减少炎性细胞浸润、提高机体免疫功能、调控水液代谢平衡而达到改善气道黏液分泌,发挥治疗哮喘的作用。同时,其在增强机体免疫功能方面的效果优于地塞米松,充分体现了“温阳补肾,宣肺平喘”的功效,为其临床治疗哮喘提供了理论依据。