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[目的]探讨护理干预联合电刺激对脊髓损伤后肢瘫大鼠早期感觉运动功能康复作用,以及脊髓损伤尾端多肽因子表达的影响。
[方法]SD成年雌性大鼠共120只,其中48只,随机分为假手术组,脊髓横断手术组(T8椎体水平横断脊髓)和护理干预联合电刺激治疗(EAS)组(T8椎体水平横断脊髓+外周针刺点电刺激治疗),每组16只随机分为两组。于第1/2/3/4周对大鼠运动功能BBB行为学评分,另各时间点进行皮层体感诱发电位(CSEP)检测,并行大鼠生物素葡聚糖胺(Biotinylateddextranamine,BDA)形态学顺行追踪研究,检测损伤脊髓纤维再生和可塑性修复情况;另一组应用免疫组化和原位杂交技术,切片观察损伤处尾端脊髓中各NTFs及受体等的表达变化。同时,将72只大鼠随机分为假手术组,脊髓横断手术组(分别1/3/7/14天)和电刺激护理干预治疗组(1/3/7/14天),每组8只,取各时间损伤水平尾侧脊髓,运用RT-PCR技术调查mRNA变化,将NTFs及受体表达变化用凝胶成像系统软件分析,测定比较各基因条带积分光密度比值,统计分析比较是否有显著性差异。
[结果]运动功能BBB评分,横断手术模型组评分最低,护理干预联合电刺激后可见运动功能增强,BBB评分随时间推移逐渐增高,有明显提高(p<0.05)。CSEP测定显示:脊髓横断损伤组各时间点均未检测到,而EAS组均检测到CSEP,表现为N1波以及P1波的潜伏期统计学上较横断组均明显缩短,P1-N1波幅较横断组增高(p<0.05)。BDA追踪显示:SCI大鼠损伤脊髓头端后角可见BDA阳性纤维,但瘢痕内和尾侧端未见BDA阳性纤维。RT-PCR结果显示:EAS治疗后尾侧脊髓各因子变化显著,NGF,PDGF,TGF-β1(1/3/7/14d),TrkA(1/7d)及IGF-1(3/14d)mRNA表达明显较手术组下调(p<0.05),而CNTF、FGF等表现为3/7/14d显著降低(P<0.05)。
[结论]脊髓横断损伤后大鼠后肢运动功能部分恢复,但皮层体感诱发电位在损伤各组均未检测到,提示感觉功能在早期康复中较难恢复,而运动功能早期即有部分主动康复。护理联合电刺激干预治疗后,能明显促进后肢瘫大鼠脊髓运动和感觉神经功能的康复,可能和轴突神经再生相关调控因子相关。
脊髓全横断后脊髓多种NTFs及其受体基因的表达变化,说明脊髓可塑性涉及多种细胞因子的调控。而护理联合电刺激干预加强治疗后,随着后肢神经功能恢复,调控损伤位点尾侧NTFs的表达变化,与局部有利的微环境以及新的神经环路形成,神经营养活性增强有关。其机制可能通过损伤水平尾侧神经元和附属骨骼肌多种多肽因子的表达变化有关,为损伤脊髓提供有利再生的微环境,促进脊髓可塑性修复和出芽再生。
[方法]SD成年雌性大鼠共120只,其中48只,随机分为假手术组,脊髓横断手术组(T8椎体水平横断脊髓)和护理干预联合电刺激治疗(EAS)组(T8椎体水平横断脊髓+外周针刺点电刺激治疗),每组16只随机分为两组。于第1/2/3/4周对大鼠运动功能BBB行为学评分,另各时间点进行皮层体感诱发电位(CSEP)检测,并行大鼠生物素葡聚糖胺(Biotinylateddextranamine,BDA)形态学顺行追踪研究,检测损伤脊髓纤维再生和可塑性修复情况;另一组应用免疫组化和原位杂交技术,切片观察损伤处尾端脊髓中各NTFs及受体等的表达变化。同时,将72只大鼠随机分为假手术组,脊髓横断手术组(分别1/3/7/14天)和电刺激护理干预治疗组(1/3/7/14天),每组8只,取各时间损伤水平尾侧脊髓,运用RT-PCR技术调查mRNA变化,将NTFs及受体表达变化用凝胶成像系统软件分析,测定比较各基因条带积分光密度比值,统计分析比较是否有显著性差异。
[结果]运动功能BBB评分,横断手术模型组评分最低,护理干预联合电刺激后可见运动功能增强,BBB评分随时间推移逐渐增高,有明显提高(p<0.05)。CSEP测定显示:脊髓横断损伤组各时间点均未检测到,而EAS组均检测到CSEP,表现为N1波以及P1波的潜伏期统计学上较横断组均明显缩短,P1-N1波幅较横断组增高(p<0.05)。BDA追踪显示:SCI大鼠损伤脊髓头端后角可见BDA阳性纤维,但瘢痕内和尾侧端未见BDA阳性纤维。RT-PCR结果显示:EAS治疗后尾侧脊髓各因子变化显著,NGF,PDGF,TGF-β1(1/3/7/14d),TrkA(1/7d)及IGF-1(3/14d)mRNA表达明显较手术组下调(p<0.05),而CNTF、FGF等表现为3/7/14d显著降低(P<0.05)。
[结论]脊髓横断损伤后大鼠后肢运动功能部分恢复,但皮层体感诱发电位在损伤各组均未检测到,提示感觉功能在早期康复中较难恢复,而运动功能早期即有部分主动康复。护理联合电刺激干预治疗后,能明显促进后肢瘫大鼠脊髓运动和感觉神经功能的康复,可能和轴突神经再生相关调控因子相关。
脊髓全横断后脊髓多种NTFs及其受体基因的表达变化,说明脊髓可塑性涉及多种细胞因子的调控。而护理联合电刺激干预加强治疗后,随着后肢神经功能恢复,调控损伤位点尾侧NTFs的表达变化,与局部有利的微环境以及新的神经环路形成,神经营养活性增强有关。其机制可能通过损伤水平尾侧神经元和附属骨骼肌多种多肽因子的表达变化有关,为损伤脊髓提供有利再生的微环境,促进脊髓可塑性修复和出芽再生。