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目的:本研究旨在探讨益气活血化湿方及其拆方对氨基核苷嘌呤霉素（PAN）诱导的足细胞骨架蛋白损伤及自噬活性降低的保护与调节作用研究。方法:1.培养永生化小鼠足细胞系（MPC-5）作为细胞实验对象,光镜下观察足细胞分化形态,采用免疫荧光技术鉴定足细胞分化成熟标志蛋白Synaptopodin表达量,流式细胞仪定量分析Synaptopodin纯度;2.通过细胞增殖实验检测不同浓度PAN对细胞存活率的影响、蛋白质印迹法分析不同浓度PAN对mTOR磷酸化水平的影响,建立PAN诱导的足细胞损伤模型;3.实验分正常组（Con）、模型组（Model）、环孢素组（CsA）、全方组（QF）、益气组（YQ）、活血组（HX）、化湿组（HS）,共7组;4.利用细胞增殖实验探索药物量效-时效关系,确立最佳药物浓度与时间;5.应用蛋白质印迹法检测各组细胞PI3K、AKT、mTOR及其磷酸化指标p-PI3K、p-AKT、p-mTOR,自噬相关蛋白Beclin 1、LC3 II/I,足细胞骨架蛋白CD2AP、α-actinin4蛋白表达情况;6.结合RT-PCR分析各组细胞CD2AP、α-actinin4的mRNA表达水平;7.运用免疫荧光技术分析Synaptopodin、LC3 II/I的荧光表达情况。结果:1.足细胞培养与鉴定:光镜下观察33℃、37℃足细胞形态,足细胞分化成熟,免疫荧光技术显示Synaptopodin呈阳性表达,流式细胞仪定量分析结果表明Synaptopodin纯度＞90%,已确立稳定的细胞培养条件;2.构建PAN诱导的足细胞损伤模型:细胞增殖实验、蛋白质印迹法检测结果显示50μg/ml PAN浓度时,造模细胞活性低于正常细胞活性且mTOR磷酸化水平明显升高（P＜0.05）,以此确定为造模浓度;3.药物量效-时效分析:通过细胞增殖实验确立药物最佳干预时间为24h,安全药物浓度分别为CsA 0.5μg/ml、QF 0.5mg/ml、YQ 0.25mg/ml、HX 0.0625mg/ml、HS 0.25mg/ml;4.对足细胞骨架蛋白的影响4.1对α-actinin-4 mRNA表达水平的影响:与正常组比较,模型组α-actinin-4mRNA表达水平显著上调（P＜0.01）;与模型组比较,各用药组α-actinin-4 mRNA表达水平均降低（P＜0.05）;与环孢素组比较,益气组和活血组α-actinin-4 mRNA表达水平未见显著差异（P＞0.05）,而全方组和化湿组表达水平高于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,化湿组α-actinin-4 mRNA表达水平与全方组未见显著差异（P＞0.05）,益气组、活血组表达显著低于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组与活血组表达水平未见显著差异（P＞0.05）,均低于化湿组（P＜0.05）;4.2对α-actinin-4蛋白表达水平的影响:与正常组比较,模型组足细胞α-actinin-4蛋白表达升高（P＜0.01）;与模型组比较,除化湿组外,其余各用药组均能下调α-actinin-4蛋白表达（P＜0.05）;与环孢素组比较,益气组与活血组α-actinin-4蛋白表达水平未见显著差异（P＞0.05）,而全方组和化湿组表达水平高于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,益气组和化湿组α-actinin-4蛋白表达水平与全方组未见显著差异（P＞0.05）,活血组表达水平显著低于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组和化湿组表达水平未见显著差异（P＞0.05）,均高于活血组;4.3对CD2AP mRNA表达水平的影响:与正常组比较,模型组CD2AP mRNA表达水平明显下调（P＜0.01）;与模型组比较,各用药组CD2AP mRNA表达水平均升高（P＜0.05）;与环孢素组比较,全方组和益气组CD2AP mRNA表达水平未见显著差异（P＞0.05）,而活血组和化湿组表达显著低于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,益气组CD2AP mRNA表达水平与全方组未见显著差异（P＞0.05）,活血组和化湿组表达显著低于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组表达水平高于活血组和化湿组（P＜0.05）,后两组未见显著差异（P＞0.05）;4.4对CD2AP蛋白表达水平的影响:与正常组比较,模型组足细胞CD2AP蛋白表达降低（P＜0.05）;与模型组比较,除化湿组外,其余各用药组均能上调CD2AP蛋白表达（P＜0.05）;与环孢素组比较,活血组和化湿组CD2AP蛋白表达水平未见显著差异（P＞0.05）,而全方组和益气组表达显著高于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,益气组CD2AP蛋白表达水平与全方组未见显著差异（P＞0.05）,活血组和化湿组表达显著低于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组和活血组表达水平未见显著差异（P＞0.05）,均高于化湿组（P＜0.05）;4.5对Synptopodin荧光表达的影响:与正常组比较,模型组Synptopodin阳性染色面积显著降低（P＜0.05）;与模型组对比,各用药组Synptopodin阳性染色面积均升高（P＜0.05）;与环孢素组比较,全方组和益气组Synptopodin阳性染色面积未见显著差异（P＞0.05）,而活血组和化湿组阳性染色面积显著低于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,益气组Synptopodin阳性染色面积未见显著差异（P＞0.05）,但活血组和化湿组阳性染色面积显著低于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组Synptopodin阳性染色面积高于活血组和化湿组（P＜0.05）,后两者未见显著差异（P＞0.05）。5.对足细胞自噬活性的影响5.1对Beclin 1蛋白表达的影响:与正常组比较,模型组Beclin 1蛋白表达降低（P＜0.05）;与模型组比较,各用药组均可促进Beclin 1蛋白表达（P＜0.05）;与环孢素组比较,全方组和化湿组Beclin 1蛋白表达未见显著差异（P＞0.05）,益气组和活血组表达水平显著高于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,化湿组Beclin 1蛋白表达未见显著差异（P＞0.05）,益气组和活血组表达水平显著高于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组和活血组表达水平未见显著差异（P＞0.05）,均高于化湿组（P＜0.05）;5.2对LC3 II/I蛋白表达的影响:与正常组比较,模型组LC3 II/I蛋白表达降低（P＜0.05）;与模型组比较,各用药组均可促进LC3 II/I蛋白表达（P＜0.05）;与环孢素组比较,全方组、活血组和化湿组LC3 II/I蛋白表达未见显著差异（P＞0.05）,益气组表达显著高于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,活血组蛋白表达未见显著差异（P＞0.05）,益气组表达水平显著高于全方组（P＜0.05）,化湿组表达水平显著低于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组LC3 II/I蛋白表达高于活血组和化湿组,后两者未见显著差异（P＞0.05）;5.3对LC3 II/I荧光表达的影响:与正常组对比,模型组LC3 II/I阳性染色面积显著降低（P＜0.01）;与模型组对比,除化湿组外,各用药组LC3 II/I阳性染色面积均升高（P＜0.05）;与环孢素组比较,全方组、益气组、活血组LC3 II/I阳性染色面积未见显著差异（P＞0.05）,化湿组显著低于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,益气组和活血组LC3 II/I阳性染色面积未见显著差异（P＞0.05）,化湿组低于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组和活血组LC3 II/I阳性染色面积未见显著差异（P＞0.05）,均高于化湿组（P＜0.05）。6.对足细胞PI3K/AKT/mTOR通路蛋白磷酸化水平的影响6.1对PI3K磷酸化水平的影响:与正常组比较,模型组PI3K磷酸化水平表达升高（P＜0.05）;与模型组比较,各用药组均可降低PI3K磷酸化水平（P＜0.05）;与环孢素组比较,全方组和化湿组PI3K磷酸化水平未见显著差异（P＞0.05）,而益气组和活血组显著高于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,化湿组PI3K磷酸化水平未见显著差异（P＞0.05）,益气组和活血组显著高于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组和活血组PI3K磷酸化水平未见显著差异（P＞0.05）,均高于化湿组（P＜0.05）;6.2对AKT磷酸化水平的影响:与正常组比较,模型组AKT磷酸化水平表达升高（P＜0.05）;与模型组比较,各用药组均可降低AKT磷酸化水平（P＜0.05）;与环孢素组比较,全方组和益气组AKT磷酸化水平未见显著差异（P＞0.05）,活血组、化湿组磷酸化水平则显著低于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,益气组AKT磷酸化水平未见显著差异（P＞0.05）,活血组、化湿组则显著低于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,三组间AKT磷酸化水平均未见显著差异（P＞0.05）;6.3对mTOR磷酸化水平的影响:与正常组比较,模型组足细胞mTOR磷酸化水平表达升高（P＜0.05）;与模型组比较,各用药组均可降低mTOR的磷酸化水平（P＜0.05）;与环孢素组比较,全方组、益气组和化湿组m-TOR磷酸化水平未见显著差异（P＞0.05）,活血组显著高于环孢素组（P＜0.05）;各拆方组与全方组比较,益气组和化湿组m-TOR磷酸化水平未见显著差异（P＞0.05）,活血组则显著高于全方组（P＜0.05）;各拆方组之间比较,益气组和化湿组m-TOR磷酸化水平未见显著差异（P＞0.05）,均低于活血组（P＜0.05）。结论:（1）PAN可诱导足细胞骨架蛋白损伤,自噬活性降低;（2）益气活血化湿方及其拆方能够抑制α-actinin-4表达,上调CD2AP、Synptopodin表达从而保护足细胞,其中全方与益气方作用显著;（3）益气活血化湿方及其拆方,能够上调自噬上游蛋白Beclin 1、自噬标志蛋白LC3II/I的表达,上调细胞自噬活性,其中全方、益气方与活血方作用显著;（4）益气活血化湿方及其拆方能够降低PI3K/AKT/mTOR信号通路的蛋白磷酸化水平,抑制自噬负调节蛋白mTOR的表达,其中全方组与化湿组对PI3K磷酸化水平抑制作用显著;各拆方组之间对AKT磷酸化水平的影响抑制作用未见显著差异;全方组、益气组与化湿组对m-TOR磷酸化水平抑制作用显著。