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目的:构建特异的靶向人C1GALT1基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)慢病毒载体,建立C1GALT1基因稳定沉默的胃癌MGC803细胞株。对慢病毒介导的shRNA靶向干扰C1GALT1胃癌MGC803稳定细胞株生物学特性进行初步观察,检测沉默C1GALT1基因表达对MGC803细胞增殖、迁移、侵袭、周期、凋亡功能的影响。方法:1.设计C1GALT1基因的特异性shRNA靶点,构建pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-PURO-h-C1GALT1干扰慢病毒包装载体,包装慢病毒并侵染MGC803细胞,构建C1GALT1基因稳定沉默的胃癌MGC803细胞株。用转染空载体的稳转细胞作为阴性对照。采用qPCR方法检测MGC803细胞中C1GALT1的mRNA水平变化,Western Blot方法检测C1GALT1蛋白水平的表达,以鉴定C1GALT1基因沉默的效果。2.采用CCK8增殖实验、细胞划痕实验、Transwell实验、流式细胞术检测C1GALT1基因沉默后对胃癌MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭、周期、凋亡能力的影响。结果:1.成功构建了特异靶向人C1GALT1基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)慢病毒载体,建立C1GALT1基因稳定沉默的胃癌MGC803细胞系。扩大培养后,运用有限稀释法最终挑取出MGC803-C1GALT1-shRNA-1-1、MGC803-C1GALT1-shRNA-1-2、MGC803-C1GALT1-shRNA-1-3这3株细胞进行QPCR和Western blot检测,鉴定显示C1GALT1基因沉默组的mRNA、蛋白质表达水平均比阴性对照组降低(p<0.05),有干扰效果,其中MGC803-C1GALT1-shRNA-1-3在MGC-803细胞中干扰下调效果最好,命名为C1GALT1-shRNA。选定C1GALT1-shRNA和转染空载体的稳转细胞(Negative Control,NC)进行后续实验。2.CCK8增殖实验结果显示,C1GALT1沉默的MGC-803稳转细胞与空载体组相比各个时间点检测的吸光度无明显变化。划痕实验结果显示在划线后0h和24h,C1GALT1沉默的稳转细胞与对空载体组相比划痕面积显示无明显差异,而在48h以后,C1GALT1沉默的稳转细胞的划痕愈合程度明显低于空载体组(p<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,C1GALT1沉默的MGC-803稳转细胞通过基质胶的细胞数明显低于空载体组细胞(p<0.001)。流式细胞术检测细胞周期结果显示在C1GALT1沉默稳转细胞中,处于G0/G1期的细胞比例小于空载体组细胞,而处于G2/M期以及S期的细胞比例高于空载体组细胞。流式细胞术检测细胞凋亡结果显示,在C1GALT1-shRNA稳转细胞中,检测到早期凋亡细胞0.53%,晚期凋亡细胞0.11%,而在空载体组细胞中未检测到明显早期凋亡细胞及晚期凋亡细胞。结论:沉默C1GALT1基因表达能降低MGC-803细胞的迁移和侵袭能力、促进凋亡。