【摘 要】
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碱性磷酸酶（ALP）和γ-谷氨酰转肽酶（GGT）被认为是几种人类癌症中的两种重要生物标志物。已经报道有很多用于检测ALP或GGT的探针,但目前还没有一种探针可以在体外或体内同时检测ALP和GGT的活性。本文设计了一种生物发光探针P-Bz-Luc,用于ALP和GGT的共响应从而实现灵敏和特异性地肿瘤成像。在体外实验中,探针P-Bz-Luc的生物发光信号均与两种酶浓度之间存在良好的线性关系,ALP的检
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碱性磷酸酶（ALP）和γ-谷氨酰转肽酶（GGT）被认为是几种人类癌症中的两种重要生物标志物。已经报道有很多用于检测ALP或GGT的探针,但目前还没有一种探针可以在体外或体内同时检测ALP和GGT的活性。本文设计了一种生物发光探针P-Bz-Luc,用于ALP和GGT的共响应从而实现灵敏和特异性地肿瘤成像。在体外实验中,探针P-Bz-Luc的生物发光信号均与两种酶浓度之间存在良好的线性关系,ALP的检测限为0.172U/L,GGT的检测限为0.634U/L。最终,生物发光探针P-Bz-Luc在ALP和GGT的共同作用下,成功应用于ALP和GGT共同高度表达的MDA-MB-fLuc-231乳腺癌细胞和肿瘤的灵敏成像。本论文结合ALP和GGT的作用位点,设计出可对两者均响应的探针分子P-Bz-Luc,并对该分子针对两种酶所展现的不同的作用特征包括灵敏性和机理等以及二者的协同作用进行了系统研究,主要内容包含以下四方面:1、介绍了生物发光成像的背景,包括来源、种类以及作为成像方法的优势;介绍了检测ALP和GGT的重要性,以及目前针对这两种酶的发展情况。这些背景为本学位论文的课题设计、研究内容等提供可靠合理的依据。2、通过一系列有机合成反应,得到目标化合物P-Bz-Luc。采用ESI-MS,1H NMR,13C NMR,31P NMR表征方法对目标化合物进行表征验证。3、探针分子P-Bz-Luc对ALP和GGT的一系列体外实验,包括荧光素酶的表达、光谱响应结果、分子对接实验、选择性实验、反应动力学实验等。其中荧光素酶作为荧光素发光的底物,对荧光素酶的表达与提取是体外实验成功开展的基础。4、在体外实验的基础上再通过细胞实验以及肿瘤模型来验证体外实验的结果。将探针分子成功用于细胞以及活体水平。
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