论文部分内容阅读
研究背景视网膜血管的正常发育对获得正常视觉至关重要。当未成熟的视网膜暴露于某些危险因素时,视网膜血管化过程可受阻,甚至会继发形成视网膜新生血管(RNV),发生早产儿视网膜病变(ROP)。ROP可对患儿视功能造成严重损害,甚至致盲,现已成为世界范围内儿童盲的首要原因。ROP的病因复杂,发病机制尚未完全阐明。除早产、低出生体重和不规范用氧等公认的主要危险因素外,近年来,大量临床观察资料显示,发生于妊娠期母体或新生儿自身的感染/炎症,也与ROP的发生及病情严重程度密切相关,且不同时期发生的感染/炎症可能参与ROP病理过程的不同阶段。相关的基础研究结果也提示,全身或局部的炎症反应可影响视网膜血管发育,并参与调控RNV形成。进一步探讨炎症因素在ROP发生发展中的作用,将有助于ROP发病机制的阐明,并为其防治策略的拓展提供新的线索及理论依据。目的观察细菌脂多糖(LPS)诱导全身炎症对大鼠氧诱导视网膜病变(OIR)的影响,以探讨新生儿自身炎症反应在ROP发生发展中的可能作用。方法1、大鼠OIR模型的建立与炎症诱导:将新生SD大鼠随机分为正常对照组(N组)、氧诱导对照组(OIR组)和实验组(OIR+LPS组)。将OIR组和OIR+LPS组新生大鼠于出生后12h内置于密闭氧箱中,控制氧浓度为80%(高氧)和21%(常氧),每24h交替一次,直至出生后14天(P14),随后在常氧条件下继续饲养幼鼠,以建立OIR模型;P7给予OIR+LPS组幼鼠腹腔注射LPS(500μg·kg-1)以诱导全身炎症反应。2、炎症对OIR大鼠全身状况的影响:在P7(LPS注射前)、P8、P11、P14等时间点对幼鼠的体重进行测量;于LPS注射前0h、注射后6h、12h、24h、48h等不同时间点行肺组织大体形态学观察。3、炎症对OIR病变过程的影响:P14、P18、P22时分别制作全视网膜铺片,行GS-isolectin B4血管染色,观察幼鼠视网膜血管化情况及RNV分布情况,并对视网膜无血管区面积和RNV严重程度进行定量分析。同时,P18时通过视网膜组织病理切片HE染色的方法,对突破内界膜的血管内皮细胞核进行计数及统计学分析。4、炎症对OIR病程中RNV形成阶段视网膜组织VEGF蛋白表达的影响:P18时,采用Western blot的方法检测视网膜组织VEGF蛋白的表达变化。5、炎症对OIR大鼠视网膜功能的影响:P18行视网膜电图(ERG)检测,并对比分析暗适应3.0反应中a波、b波及暗适应3.0 Ops反应中O2子波的潜伏期和幅值。结果1、炎症对OIR大鼠全身状况的影响:在各检测时间点,OIR+LPS组及OIR组幼鼠的体重均低于N组(P<0.05),至P14时三组幼鼠的体重分别为(30.67±2.63)g、(33.12±2.11)g和(36.21±2.34)g,且在LPS注射后的所有时间点OIR+LPS组幼鼠的体重比OIR组更低(P<0.05)。肺组织大体形态学观察发现,LPS注射后6h、12h、24h,OIR+LPS组幼鼠肺组织呈现明显的炎性充血状态。2、炎症对OIR病变过程的影响:N组幼鼠的视网膜于P14已基本完成血管化;观察至P22无RNV出现。OIR组幼鼠在P14时存在视网膜无血管区,至P22视网膜血管化基本完成,P14、P18及P22时视网膜无血管区面积分别约占视网膜总面积的(19.86±2.78)%、(4.56±1.46)%和(1.01±0.90)%;P18视网膜血管区与无血管区交界处可见RNV出现,至P22时RNV病变消退。LPS干预后,OIR病变过程中的视网膜血管化阻滞和RNV状况均明显加重,P14、P18和P22三个检测时间点,视网膜无血管区面积分别占(27.32±3.58)%、(8.48±1.10)%和(3.82±1.39)%,与OIR组相比差异有统计学意义(P<0.05)。P18时,OIR+LPS组RNV面积为(1.10±0.14)%,大于OIR组[(0.72±0.13)%,P<0.05];RNV累及钟点数为9.89±1.72,较OIR组明显增多(3.83±0.75,P<0.05);突破内界膜的内皮细胞核数为9.89±1.72,多于OIR组(6.06±1.53,P<0.05)。此外,OIR+LPS组因RNV引起的视网膜出血更明显,至P22时RNV仍未完全消退。3、炎症对RNV形成阶段视网膜组织VEGF蛋白表达的影响:Western blot检测结果显示,P18时,OIR组和OIR+LPS组视网膜组织VEGF蛋白的相对表达量均高于N组,其中OIR+LPS组的表达量最高,三组间两两差异有统计学意义(P<0.05)。4、炎症对OIR幼鼠视网膜功能的影响:P18时,与N组相比,OIR组和OIR+LPS组幼鼠ERG各检测波的波形明显低平,甚至呈现熄灭样,全视网膜功能显著下降。LPS干预后视网膜功能更差,主要表现为在暗适应3.0反应中,OIR+LPS组a波和b波的潜伏期[(20.67±3.78)ms和(107.83±18.31)ms],与N组[(16.00±1.26)ms和(80.33±4.27)ms]及OIR组[(17.67±0.82)ms和(86.50±6.28)ms]相比均明显延长(P<0.05)。结论LPS诱导的全身炎症可导致大鼠OIR病变过程中视网膜血管化阻滞情况更为严重,进而上调视网膜组织中VEGF蛋白的表达,使RNV生成增多,并伴有视网膜功能下降。提示新生儿期的全身炎症反应可参与ROP的病理过程,使病情趋向严重。