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宫颈癌(Cervical cancer,CC)目前被关注度愈加增高,越来越频繁的被人们提及,是全球女性第四大常见恶性肿瘤,且高发人群年轻化。随着人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)疫苗的预防性接种、HPV感染筛查的逐渐普及、宫颈癌早期诊治方面的极大改善,其病死率呈现一定下降趋势,但由于宫颈癌发病的分子机制尚不明确,晚期及复发性宫颈癌患者对放化疗敏感性较低,预后较差,极易转移和复发,现仍缺乏有效治疗手段,对女性生命健康构成严重威胁。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,Lnc RNA)寓于非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA)中。近年来,大量研究发现LncRNA可调控多种肿瘤细胞的分子生物学功能,具有增殖、迁移、侵袭及凋亡的能力,因此对lnc RNA关于宫颈癌发生及发展的分子生物学功能进行广泛而深入的研究。UC001kfo是潘延凤等研究人员从肝癌组织中筛选出来的一种lnc RNA,该基因位于染色体Chr10(q3.31),共2 043碱基对(2 043base pair,2 043bp)。α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)为UC001kfo的靶蛋白,且UC001kfo和α-SMA在染色体上存在部分重叠位点,而α-SMA又参与上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程,所谓EMT过程,即通过特定程序将上皮细胞转化为具有间质表型的细胞,肿瘤细胞能穿透基底膜到达间质,从而影响肿瘤细胞的增殖与转移,经淋巴转移和血行转移至其它脏器,导致恶性肿瘤的发生。近年来大量研究显示UC001kfo可通过调控细胞增殖、分化等多种途径参与肝癌、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤的进展,但目前尚无关于UC001kfo在宫颈癌方面的相关研究,为此本实验检测UC001kfo在宫颈癌细胞系He La中的表达水平,研究UC001kfo对宫颈癌He La细胞生物学行为的影响,以及UC001kfo与α-SMA在宫颈癌发生发展中的作用关系,为宫颈癌分子靶向治疗提供新方向。本课题选用人宫颈癌细胞株He La和人正常宫颈上皮永生化细胞株H8为细胞模型,采用RT-PCR技术检测两组细胞中UC001kfo的相对表达量。由吉玛公司成功构建含UC001kfo基因的重组真核表达载体p CDNA3.1(+)-UC001kfo,并合成si RNA的UC001kfo的干扰序列。通过脂质体转染技术转染,构建control组(空白对照组)、p CDNA3.1(+)-UC001kfo组(阳性组)、p CDNA3.1(+)-Vector组(阳性对照组)、si RNA-UC001kfo组(阴性组)和si RNA-NC组(阴性对照组)。各组细胞在转染48h后,采用RT-PCR技术检测转染效率;采用CCK-8实验检测在转染48h后12、24、36、48、72h各组细胞的增殖能力。采用划痕实验、Transwell实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力;采用RT-PCR技术检测各组细胞中α-SMA的表达水平;通过Western blotting实验检测UC001kfo对EMT上皮表型标志物E-cadherin,间质表型标志物Vimentin和α-SMA的蛋白表达情况。在p CDNA3.1(+)-UC001kfo.3组中沉默α-SMA表达后,采用Western blotting实验检测,与p CDNA3.1(+)-UC001kfo组相比,该组EMT相关蛋白表达的异同性。研究结果显示,UC001kfo在He La细胞(2.221 9±0.153)中的表达水平高于H8细胞(1.001 7±0.072),P<0.05。细胞功能实验结果显示上调UC001kfo的表达能促进HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭能力,P<0.05;沉默UC001kfo的表达抑制He La细胞的增殖、迁移及侵袭能力,P<0.05。此外,RT-PCR结果提示α-SMA在p CDNA3.1(+)-UC001kfo组(2.682±0.020)中的相对表达量较高,在si RNA-UC001kfo组(0.304±0.052)中表达量较低,P<0.01;Western blotting实验结果显示在p CDNA3.1(+)-UC001kfo组中间质表型波形蛋白(Vimentin)(1.2342±0.042)及α-SMA(1.217±0.017)呈高表达,而上皮表型E-钙粘蛋白(E-cadherin)(0.713 3±0.007)呈低表达趋势,P<0.01;在p CDNA3.1(+)-UC001kfo.3组中沉默α-SMA表达后,Western blotting实验结果显示,与p CDNA3.1(+)-UC001kfo组[E-cadherin(0.330±0.018),Vimentin(0.473±0.008),α-SMA(0.657±0.005)]相比,E-cadherin(0.482±0.011)表达量升高,而Vimentin(0.401±0.018),α-SMA(0.200±0.008)表达量降低,P<0.01。综上所述,UC001kfo在宫颈癌发生发展中可能起促癌作用,其作用机理可能通过调控α-SMA产生对宫颈癌HeLa细胞的影响,说明UC001kfo可能是靶向治疗宫颈癌的新型标记分子。