【摘 要】
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第一部分各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞活性及细胞周期的影响目的探讨各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞活性和细胞周期的影响。方法体外培养PC12细胞,用神
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第一部分各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞活性及细胞周期的影响目的探讨各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞活性和细胞周期的影响。方法体外培养PC12细胞,用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞神经元样分化,用不同浓度的多巴胺神经元毒素Lactacystin、MPP+、6-OHDA和鱼藤酮处理细胞,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞代谢活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布。结果NGF诱导分化后PC12细胞停止生长,大部分处于静止期(G0/G1期),各种多巴胺神经元毒素处理后,PC12细胞活性呈浓度依赖性和时间依赖性降低,细胞凋亡率呈时间依赖性升高(P < 001)。同时细胞周期中G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多(P < 001)。结论细胞周期重新启动参与多巴胺神经元毒素诱导的细胞凋亡。第二部分各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞周期调节因子的影响目的探讨各种多巴胺神经元毒素对多巴胺神经元细胞周期调节因子表达的影响。方法体外培养PC12细胞,用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞神经元样分化,用不同浓度的多巴胺神经元毒素Lactacystin、MPP+、6-OHDA和鱼藤酮处理细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察细胞周期素(CyclinA、CyclinD1、CyclinB1、CyclinE)和细胞周期素依赖性激酶(CDK2、CDK4、CDC2)mRNA表达的改变。结果各种多巴胺神经元毒素处理后,PC12细胞的细胞周期调节因子CyclinA、CyclinD1和CDC2 mRNA表达水平升高(P < 001),而CyclinB1、CyclinE、CDK2和CDK4 mRNA水平无明显改变(P > 005)。结论各种多巴胺神经元毒素通过上调CyclinA、CyclinD1和CDC2的表达,促进多巴胺神经元细胞周期重新启动。第三部分ERK1/2通路和RB蛋白在多巴胺神经元细胞周期重启中的作用目的探讨ERK1/2通路和RB蛋白在多巴胺神经元细胞周期重启中的作用。方法体外培养PC12细胞,用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞神经元样分化,用不同浓度的多巴胺神经元毒素Lactacystin、MPP+、6-OHDA和鱼藤酮处理细胞,免疫细胞化学方法和免疫印迹方法观察PC12细胞ERK1/2通路活化和RB蛋白磷酸化的变化。结果各种多巴胺神经元毒素处理后,总的ERK1/2水平无明显改变(P > 005),而磷酸化ERK1/2水平在4 h后明显升高,一直持续到24 h (P < 001)。同时RB蛋白表达水平下降,而磷酸化RB蛋白水平明显升高(P < 001)。结论ERK1/2通路活化和RB蛋白磷酸化参与了多巴胺神经元毒素诱导的细胞周期重新启动和细胞凋亡。
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