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目的：通过研究SIRT6调控Bax凋亡信号通路促进肝癌细胞凋亡逃逸,来探讨肝细胞肝癌的发生发展机制。方法：1.利用Western Blot和qRT-PCR检测SIRT6在101例肝癌病人和各种肝癌细胞系中的表达。Kaplan-Meier分析SIRT6与肝癌病人预后相关。2.利用慢病毒介导技术在肝癌细胞上沉默SIRT6基因的表达,WesternBlot验证SIRT6沉默效率；通过台盼蓝染色实验分析SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖的影响；平板集落实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞集落形成能力的影响；EdU标记实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞DNA合成的影响；流式细胞计数和Western Blot检测SIRT6基因沉默对细胞凋亡的影响。3.在永生化的肝细胞MIHA上过表达SIRT6, WesternBlot验证SIRT6过表达是否成功；通过台盼蓝染色实验分析SIRT6对永生化肝细胞增殖的影响；软琼脂集落形成实验检测SIRT6对永生化肝细胞非锚定生长能力的影响；EdU标记实验检测SIRT6对永生化肝细胞DNA合成的影响；流式细胞计数和Western Blot检测SIRT6对永生化肝细胞凋亡的影响。4.利用qRT-PCR分析SIRT6沉默后肝癌细胞内凋亡相关基因mRNA水平的变化；继而使用Western Blot验证筛选出的凋亡相关蛋白的变化水平。利用免疫细胞化学和Western Blot分析Bax蛋白在SIRT6基因沉默后细胞定位的变化；利用台盼蓝染色实验检测沉默Bax基因对SIRT6基因沉默引起的肝癌细胞增殖的影响；利用流式细胞学和Western Blot检测沉默Bax对SIRT6基因沉默引起的肝癌细胞凋亡的影响。5.利用双荧光素酶报告系统分析Bax启动子的关键区域,并检测SIRT6基因沉默对Bax基因启动子的关键区域的影响；ChIP检测SIRT6对Bax启动子的关键区域组蛋白乙酰化位点的影响；ChIP进一步检测SIRT6基因沉默对Bax,启动子转录因子的影响。6.利用Western Blot检测SIRT6和Ku70在细胞质和细胞核中的定位；IP实验检测SIRT6与Ku70的相互关系。Western Blot检测缺失SIRT6对Ku70蛋白表达量的影响。IP实验检测SIRT6对Ku70乙酰化水平的影响；IP实验进一步检测SIRT6基因沉默对Ku70-Bax复合物的影响。7.在在荷氏移植瘤模型试验中验证SIRT6对肝癌细胞生长的影响。结果：1.在本研究中我们发现SIRT6在大量肝癌病人中表达明显增高,并且SIRT6增高与肝细胞肝癌病人不良预后(p=0.024)高度相关。同时发现SIRT6在肝癌细胞系上表达水平较永生化肝细胞MIHA和原代肝细胞PHH高。2.在多个肝癌细胞系上沉默SIRT6可以抑制肝癌细胞的增殖,并抑制肝癌细胞DNA合成和抑制肝癌细胞集落形成；沉默SIRT6可以诱导肝癌细胞凋亡。3.在永生化肝细胞上过表达SIRT6可以促进永生化肝细胞增殖,促进永生化肝细胞DNA合成和促进永生化肝细胞非锚定生长能力；SIRT6可以降低阿霉素诱导的凋亡。4.SIRT6可以通过Bax信号通路来发挥抗肝癌细胞凋亡作用。SIRT6缺失可以促进Bax从细胞核和细胞质向线粒体转位。沉默Bax可以拮抗SIRT6缺失引起的肝癌细胞凋亡。5.SIRT6被招募到Bax启动子上,通过去乙酰化组蛋白H3K9位点,抑制Bax启动子活性。在缺失SIRT6时,结合于Bax启动子上的转录因子p53和E2F-1明显增加。6.SIRT6、Bax和Ku70可以在细胞质中形成复合物,缺失SIRT6可以通过乙酰化Ku70促进Ku70-Bax复合物的分离,阻止Bax向线粒体转位。7.在荷氏移植瘤模型试验中发现SIRT6基因沉默可以抑制移植瘤的生长。结论：SIRT6在肝细胞肝癌形成中起着促进进用,因此针对SIRT6的治疗可能成为肝细胞肝癌治疗的一个靶点。