【摘 要】
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目的:将参蛤益肺胶囊应用于COPD稳定期大鼠模型,观察其对大鼠模型TGF-β1/Smad信号通路的影响,在以往临床和实验研究基础上,继续探索参蛤益肺胶囊的治疗机制,为其临床应用奠定理论基础。方法:25只雌鼠,25只雄鼠,均为清洁级SD大鼠,随机选出5只雌鼠,5只雄鼠为空白组,另40只为造模组,采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法来建立COPD稳定期大鼠模型。6周造模成功后,将造模组的大鼠按雌雄各
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目的:将参蛤益肺胶囊应用于COPD稳定期大鼠模型,观察其对大鼠模型TGF-β1/Smad信号通路的影响,在以往临床和实验研究基础上,继续探索参蛤益肺胶囊的治疗机制,为其临床应用奠定理论基础。方法:25只雌鼠,25只雄鼠,均为清洁级SD大鼠,随机选出5只雌鼠,5只雄鼠为空白组,另40只为造模组,采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法来建立COPD稳定期大鼠模型。6周造模成功后,将造模组的大鼠按雌雄各半的原则随机分为4组,分别为:模型组、参蛤益肺胶囊药物组一（简称药物组一）、参蛤益肺胶囊药物组二（简称药物组二）、茶碱组。开始给药,空白组、模型组以蒸馏水代替,各治疗组则灌以相应药物,1次/天,称量体重1次/周,给药量按体重的变化而调整,直至18周结束。在给药期间除空白组以外的各组仍用香烟烟熏,2次/天,4支/次,30min/次,一天内每2次熏吸间隔大于3h。分两时间阶段取材,分别为第12和18周结束后的第一天,所有大鼠取材前禁食12h,不禁水。采集腹主动脉血,离心取血清,-80℃冰箱保存备用。开胸,快速取出大鼠的双肺,分离出右肺下叶做常规的HE染色,然后取部分肺与气道组织迅速放入冻存管中,-80℃冰箱保存。用ELISA双抗夹心法检测血清IL-8、TNF-a、TGF-β1水平,采用实时荧光定量PCR方法检测TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7基因表达,应用western blot技术测定TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达。结果:1、实验12周结束后,模型组血清中IL-8、TNF-α的表达水平高于各组（P＜0.05）,茶碱组的IL-8、TNF-α的水平下降最为显著（P＜0.05）,药物组一与药物组二的IL-8下降差异无统计学意义（P＞0.05）,药物组二比药物组一TNF-α的水平下降明显（P＜0.05）。实验18周结束后,模型组的IL-8、TNF-α的水平高于各组（P＜0.05）,茶碱组、药物组一、药物组二降低IL-8水平的表达无差异（P＞0.05）。TNF-α的水平茶碱组、药物组二比药物组一下降明显（P＜0.05）,茶碱组、药物组二降低TNF-α水平的表达无差异（P＞0.05）。2、血清中TGF-β1的表达显示:实验12周结束后,模型组明显高于各组（P＜0.05）,茶碱组、药物组二比药物一减少明显（P＜0.05）,茶碱组、药物组二水平下降无差异（P＞0.05）。实验18周结束后,模型组明显高于各组（P＜0.05）,茶碱组、药物组一、药物组二水平下降无差异（P＞0.05）。实验12周结束后,肺以及气道组织中TGF-β1、Smad2、Smad3的基因表达在模型组中明显高于各组（P＜0.05）,TGF-β1、Smad3的蛋白表达模型组显著高于各组（P＜0.05）,TGF-β1、Smad3的基因表达茶碱组、药物组二比药物一减少（P＜0.05）,茶碱组、药物组二相比TGF-β1、Smad3的基因表达下降差异无统计学意义（P＞0.05）,TGF-β1、Smad3蛋白的表达药物组二比药物组一、茶碱组明显减少（P＜0.05）,药物组一与茶碱组相比无差异（P＞0.05）,茶碱组、药物组一、药物组二的Smad2基因的表达差异无统计学意义（P＞0.05）,Smad7的基因及蛋白表达模型组明显低于各组（P＜0.05）,其基因表达茶碱组、药物组二高于药物组一（P＜0.05）,茶碱组、药物组二相比差异无统计学意义（P＞0.05）,其蛋白表达各治疗组间差异无统计学意义（P＞0.05）。实验18周结束后,肺及气道组织中TGF-β1、Smad2、Smad3的基因表达模型组明显高于各组（P＜0.05）,Smad7的基因及蛋白表达在模型组中明显低于各组（P＜0.05）,茶碱组、药物组一、药物组二TGF-β1、Smad7的基因及蛋白表达无差别（P＞0.05）,Smad3的基因表达各治疗组见无差异（P＞0.05）,其蛋白表达药物组二较茶碱组减少（P＜0.05）,药物组一与茶碱组、药物组二相比无差异（P＞0.05）,Smad2的基本表达茶碱组与药物组一、药物组二相比无差异（P＞0.05）,药物组二比药物组一下降明显（P＜0.05）。结论:1、烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法可以成功建立COPD缓解期大鼠模型。2、参蛤益肺胶囊可减少COPD大鼠血清中的炎性介质IL-8、TNF-α的表达水平,减轻COPD的气道炎症,减少炎性细胞对肺部的损害,且治疗时间越长,参蛤益肺胶囊常规高剂量在降低TNF-α水平的表达上疗效越佳。3、参蛤益肺胶囊对TGF-β1/Smads信号通路有调控作用,可减少TGF-β1、Smad2、Smad3的表达,增加Smad7的表达,减轻气道重塑的程度,延缓COPD疾病的发展,参蛤益肺胶囊常规高剂量在抑制Smad2表达上疗效更佳。
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