论文部分内容阅读
纤维素酶是天然纤维生物降解最主要的酶类,木霉是目前发现的产纤维素酶能力最强的微生物,其高效的纤维素酶表达系统是研究丝状真菌表达调控的最好材料之一。本研究以纤维素酶高产菌株康宁木霉(Trichodermakoningii)AS3.2774为对象,对其纤维素酶cbh2基因进行克隆和分析。
研究比较了四种DNA提取方法对康宁木霉DNA提取效果,结果表明简化CTAB法对康宁木霉的DNA提取效果最好。利用植物RNA提取试剂盒提取康宁木霉的RNA,结果植物RNA提取试剂盒可成功的提取康宁木霉RNA。
依据GenBank中已公布的木霉cbh2基因序列设计合成了一对引物,采用PCR和RT-PCR法得到了cbh2基因及其cDNA。将该基因及其cDNA与pMD19-T载体连接,转入大肠杆菌并进行序列测定。
测序结果表明康宁木霉AS3.2774的cbh2基因全长1583bp,G/C含量为55.59﹪。通过同源性比较,其与GenBank中已公布的木霉其他菌株cbh2基因序列同源性达最高可达87.49﹪。
康宁木霉AS3.2774的cbh2cDNA全长1413bp,G/C含量为56.41﹪。通过同源性比较,其与GenBank中已公布的木霉序列同源性最高可达91.72﹪。
对康宁木霉cbh2基因结构进行分析,对比cbh2基因组DNA序列与cDNA序列,证明该基因由4个外显子组成,被3个内含子间断隔开,其中内含子分别在93-143bp,528-583bp,832-894bp三处。可编码470个氨基酸的多肽,其中前19个氨基酸为信号肽。