目的：冠心病（Coronary heart disease，CHD）是目前世界上发病率和致死率最高的疾病之一，氯吡格雷合并阿司匹林双联抗血小板治疗是冠心病患者急性致死性血栓栓塞的主要治疗策略。然而，研究发现约 30%的患者出现氯吡格雷抵抗（Clopidogrel resistence，CR），而合并糖尿病是冠心病患者发生氯吡格雷抵抗的一个主要风险因素。本课题以血小板为研究切入点，探讨冠心病合并糖尿病患者氯吡格雷抵抗的发生率及其与再发心血管事件的关联性，并初步探讨血小板p66Shc/NO信号通路对其调控作用，以期为冠心病合并糖尿病患者抗血小板治疗提供理论依据和新的治疗药物靶点。
　　方法：一、临床研究：选取2018年10月至2019年10月于东南大学附属中大医院心血管内科的冠心病患者257名。按照是否合并2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM），将患者分为冠心病未合并2型糖尿病组（CHD-T2DM组）以及冠心病合并 2 型糖尿病组（CHD+T2DM 组），所有患者行冠脉造影检查前均予氯吡格雷负荷剂量300mg，分别于患者服用氯吡格雷负荷剂量前（0 h）和服用氯吡格雷负荷剂量后12 h（10-14 h）进行血样采集。采用光学投射比浊法（Light transmittance aggregometry，LTA）检测两组患者的血小板聚集功能，并根据患者服用氯吡格雷前后的最大血小板聚集率（Maximal aggregation rate，MAR），计算血小板抑制率（Inhibition of platelet aggregation，IPA），从而判断患者对氯吡格雷的反应性。对患者进行6个月的随访，调查两组患者心血管死亡、心肌梗死和卒中等主要心血管事件（Major adverse cardiovascular events，MACE）的发生情况以及与氯吡格雷反应性的相关性。
　　二、基础研究：建立基于富血小板血浆的过滤器法来分离纯化血小板，采用Bicinchonininc Acid（BCA）蛋白浓度测定、RNA浓度检测等方法验证所得血小板样品的含量，并采用 qRT-PCR 和琼脂糖凝胶电泳进一步验证血小板的纯度，确保得到高度纯化的血小板样品。根据是否发生氯吡格雷抵抗进一步将患者分为四组，即：冠心病未合并2型糖尿病非氯吡格雷抵抗组（CHD-T2DM-CR组）、冠心病未合并2型糖尿病氯吡格雷抵抗组（CHD-T2DM+CR组）、冠心病合并2型糖尿病非氯吡格雷抵抗组（CHD+T2DM-CR 组）以及冠心病合并 2 型糖尿病氯吡格雷抵抗组（CHD+T2DM+CR组）。通过NOS活性检测试剂盒、qRT-PCR、Western Blot等方法检测各组患者NO、p66Shc等指标在血小板的表达水平。
　　结果：1）CHD+T2DM组患者的基础血小板聚集率显著高于CHD-T2DM组（P<0.001）；服用氯吡格雷后，CHD+T2DM组患者氯吡格雷抵抗和低反应的发生率高于CHD-T2DM组（P < 0.05），CHD+T2DM组患者MACE的发生率也显著高于CHD-T2DM组（P<0.05）；2）CHD+T2DM+CR组的血浆NO水平和血小板NO水平显著低于CHD-T2DM-CR组（P < 0.05）；CHD+T2DM+CR组血小板p66Shc在mRNA水平和蛋白水平的表达均显著高于CHD-T2DM-CR组（P<0.05）。血小板p66Shc/NO信号通路可能参与介导CHD+T2DM患者氯吡格雷抵抗的发生。
　　结论：合并T2DM的CHD患者相比较于未合并T2DM的CHD患者，基础血小板聚集率及服用氯吡格雷后发生氯吡格雷抵抗和低反应的发生率更高，并显著增加了再发MACE的风险。进一步的分析发现，CHD+T2DM+CR组患者血浆和血小板内的NO水平显著低于CHD-T2DM-CR组，血小板p66Shc的表达水平也显著高于 CHD-T2DM-CR 组，血小板 p66Shc/NO 信号通路可能参与介导CHD+T2DM患者氯吡格雷抵抗。