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炎症是具有血管系统的活体组织受到外伤、出血或病原感染等刺激时所发生的防御反应,是机体的自动防御过程。急性肺损伤是各种直接和间接致伤因素引起的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,造成弥漫性肺间质及肺泡水肿,其严重阶段被称为急性呼吸窘迫综合症。脂多糖是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要成分,也称为内毒素,它能有效地引起细菌产生的炎症反应,能够极大地模拟败血症和急性肺损伤反应,因此是实验室常用的急性肺损伤模型。大量实验数据表明LPS可以刺激微生物分泌不同的炎症介质,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)等。近年来,也有很多关于治疗急性肺损伤的报道,如液体管理、糖皮质激素、表面活性剂、干细胞等,但是急性肺损伤的致死率仍居高不下。 本文通过LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型证明桔梗汤能显著抑制由脂多糖引起的TNF-α和IL-8等炎症介质的表达,减少炎症细胞的浸润,改善肺部组织的水肿和坏死脱落。利用TNF-α诱导的细胞炎症模型考察了桔梗汤在细胞水平的抗炎效果,通过NF-κB抑制活性相关的双荧光素酶基因报告系统筛选出11个抗炎活性成分,通过同位素标记定量方法(iTRAQ)对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的肺组织进行分析,得到67个差异蛋白,对其进行蛋白互作分析,得到3个主要的功能区:抗炎与免疫、肌肉收缩和染色体。借助网络药理学和分子对接,初步预测了桔梗汤中活性成分和靶点的相互作用,甘草酸和甘草皂苷G2可以影响LCK和BTK的表达,甘草皂苷G2和(芹糖)甘草苷调控Ras蛋白,甘草酸也可以调控MEK1的表达。桔梗中的桔梗皂苷D能够调控PI3K/AKT通路中AKT的表达,而远志酸和桔梗酸A则是通过调控GSK3β发挥作用的。 通过二甲苯诱导的小鼠鼠耳肿胀实验考察了芒果核仁在整体动物水平的抗炎效果,实验结果表明芒果核仁可以有效缓解小鼠鼠耳水肿情况,通过液质联用结合双荧光素酶报告系统对其提取物中的抗炎活性物质进行筛选,发现10个化合物具有NF-κB抑制活性,主要为芒果苷和没食子酸鞣质类化合物两大类。通过对芒果苷进行叠氮化修饰,磁性捕获LPS介导的小鼠肺组织蛋白,分离并鉴定到了903种蛋白信息,使用Protein Score和Coverage软件进行条件过滤,预测其中的19种蛋白可能为芒果苷的靶点蛋白,对这19种蛋白进行蛋白互作分析,发现蛋白功能主要与三方面相关:抗炎和免疫、肌肉收缩及蛋白质合成。芒果苷的抗炎靶点主要为HSPA5,LCP1和Ywhae。其中,LCP1通过刺激Tcell从而引发Ras/ERK和Ras/p38通路,进而调控NF-κB的表达;Ywhae通过调控Raf,进而影响Raf/ERK通路的表达;而HSPA5则是通过调控MKK进而影响JNK的表达。因此,芒果苷通过调控MAPK的不同通路从而起到调控NF-κB表达的作用。 本文将液质联用技术串联双荧光素酶报告系统成功用于中药中NF-κB抑制剂的筛选,并筛选出了一批潜在的抗炎活性单体。此外,通过化学物质组学整合蛋白质组学的方法探索了桔梗汤和芒果核仁提取物抗炎的作用机制。这对研究传统中药的抗炎作用机制是一个新的尝试,提供了一个新的思路,有利于加快中药现代化的研究步伐。