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目的:酒精成瘾（alcohol addiction）是对个人及社会造成严重危害的一种常见精神类疾病。成瘾发生和维持过程中,脑对成瘾药物的反应包括神经元的适应性改变和突触可塑性改变。本研究通过建立小鼠酒精双瓶选择模型及其他酒依赖相关行为学模型,观察突触结合蛋白Syt1敲除对小鼠的酒依赖相关行为的影响,并分析在此过程中发生的神经适应性改变及其可能机制,为探讨酒精依赖和滥用的分子调控机制提供新的思路。方法:1.繁殖Syt1基因敲除小鼠(Syt1 knockout,Syt1+/-),剪取鼠尾提取总DNA,通过PCR方法鉴定并选择小鼠基因型。采用q PCR和Western blot实验检测Syt1的敲除情况。2.小鼠双瓶选择实验:选取8周龄的WT和Syt1+/-小鼠,分为WT组和Syt1+/-组,每组9只。（1）双瓶选择实验:将每只小鼠在单独鼠笼饲养,每笼装置2个相同的小鼠饮水瓶,分别用于饮水和饮酒精,小鼠依次饮用浓度为2.5%、5%、10%、10%和10%的酒精,检测在梯度增加酒精浓度过程中每只小鼠饮酒量以及酒精偏好度的情况,同时观察饮用液体总量的改变。（2）检测Syt1对小鼠味觉偏好（糖精和奎宁）的影响,并观察WT组和Syt1+/-组小鼠的饮用液体总量和偏好度。3.另选取8周的WT和Syt1+/-小鼠各10只,检测Syt1敲除对小鼠血液酒精浓度的影响。4.检测Syt1缺失对小鼠的条件性位置偏爱和翻正反射行为的影响。5.相关机制探索:选用WT小鼠与Syt1+/-小鼠分为4组:WT+Water组、Syt1+/-+Water组、WT+Alcohol组和Syt1+/-+Alcohol组,每组6只。其中3只用于液质联用实验,3只用于Western blot实验。（1）采用液质联用方法检测小鼠杏仁核中谷氨酸和γ-氨基丁酸含量。（2）通过Western blot技术检测小鼠杏仁核中Syt1的相对表达量。（3）采用Western blot法分析Syt1对小鼠杏仁核中突触相关蛋白（NR1和NR2B）的影响。结果:1.Syt1+/-小鼠鉴定。荧光定量PCR和Western blot法检测显示,WT小鼠脑组织多个部位均有Syt1表达,以杏仁核、前额叶、海马与伏隔核中较为丰富。相对于WT小鼠,Syt1+/-小鼠脑组织的Syt1 m RNA和蛋白表达量分别下调约55%和41%,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.双瓶选择行为检测（1）酒精双瓶选择实验:当小鼠饮酒浓度为2.5%时,WT组和Syt1+/-组的小鼠饮酒量和酒精偏好度均无明显差异。当饮用的酒精浓度逐渐升高到10%时,两组小鼠的饮酒量均逐渐增加。在维持10%浓度酒精后,Syt1+/-组小鼠的饮酒量和酒精偏好度均显著低于WT组（P＜0.05）。实验过程中,两组小鼠饮用的液体总量均无显著差异。（2）糖精和奎宁双瓶选择实验:在糖精饮用实验中,小鼠对于不同浓度的糖精（0.04%和0.08%）饮用量无组间差异;随着糖精浓度增高,两组小鼠饮用糖精量明显增加（P＜0.01）,但糖精饮用偏好度与饮用液体总量均无组间差异。在奎宁饮用实验中,两组小鼠对于不同浓度的奎宁（30μM和60μM）饮用量无差异;随着奎宁浓度增高,WT组奎宁饮用量增加（P＜0.05）;小鼠奎宁饮用偏好度与饮用液体总量无组间差异。3.血液酒精浓度测试显示,WT组和Syt1+/-组小鼠血液酒精浓度无统计学差异;但无论是WT组还是Syt1+/-组,在注射酒精后2 h血液酒精较1 h时均明显降低（P＜0.05和P＜0.01）。4.条件性位置偏爱行为实验显示,在预适应期将过度偏爱某一侧的小鼠剔除后,两组小鼠对伴药箱的偏好度无显著性差异。训练期之后,酒精诱导小鼠产生了对药物配对隔室的显著偏好（P＜0.001）;在测试期,Syt1+/-小鼠在伴药箱的停留时间明显增多（P＜0.01）。翻正反射实验结果显示,两组小鼠注射酒精后的镇静潜伏期无差异,但Syt1+/-小鼠酒精镇静作用的持续时间比WT组小鼠显著增加（P＜0.001）。5.相关机制探索（1）神经递质检测实验显示:饮水小鼠中,Syt1+/-小鼠杏仁核中的谷氨酸含量明显高于WT小鼠（P＜0.01）,而饮酒小鼠中Syt1+/-小鼠的谷氨酸含量比WT小鼠显著降低（P＜0.05）。WT小鼠饮酒之后杏仁核中谷氨酸含量有增加的趋势,而Syt1+/-小鼠饮酒之后谷氨酸含量明显降低（P＜0.01）。WT小鼠和Syt1+/-小鼠饮酒之后杏仁核中的γ-氨基丁酸含量较饮酒前均有所升高（P＜0.05）。（2）小鼠杏仁核中Syt1的表达表明,WT小鼠饮酒之后Syt1的表达量显著升高（P＜0.05）。饮水小鼠和饮酒小鼠中,Syt1+/-小鼠杏仁核中Syt1的表达量均显著低于WT小鼠（P＜0.05和P＜0.01）。（3）突触相关蛋白检测显示,两组小鼠杏仁核中NR2B的表达水平存在明显的统计学差异。饮水与饮酒小鼠中,Syt1+/-小鼠的NR2B表达量低于WT小鼠（P＜0.05和P＜0.01）,而饮酒之后的WT小鼠NR2B表达量相比于饮酒前显著增加（P＜0.05）。两组小鼠杏仁核中NR1的表达水平与NR2B有相似的变化趋势。结论:1.Syt1在小鼠脑组织中均有一定量的表达,其中杏仁核、前额叶、海马和伏隔核中表达较为丰富。Syt1+/-小鼠各个脑区的Syt1表达量较WT小鼠均有不同程度的降低。2.Syt1缺失小鼠的饮酒量及酒精偏好度均降低,并且这种偏好与味觉偏好无关;然而,Syt1缺失并不影响小鼠酒精代谢速度。但是Syt1缺失可以干扰酒精奖赏效应与特定环境关联性之间的建立,并增加小鼠对于酒精镇静作用的耐受性。3.Syt1缺失引起的小鼠行为学改变可以通过影响谷氨酸和γ-氨基丁酸的释放而引起神经元适应性改变,并且可以调节NMDAR的NR1与NR2B亚基的含量而引起突触可塑性的改变。