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肠球菌被认为是多种耐药基因储存库,极大加速了耐药基因传播,poxtA基因出现以后,可同时介导氟苯尼考与恶唑烷酮类药物双重耐药,因此迫切需要开展肠球菌恶唑烷酮类药物交叉耐药基因poxtA的扩散机制研究,为耐药基因传播的风险评估提供科学依据。poxtA基因是一种新型的氟苯尼考-恶唑烷酮-四环素类耐药基因,poxtA基因编码的蛋白质与optrA基因的同源性为32%,并且poxtA基因显示出ATP结合盒(ABC)蛋白超家族的F谱系的典型特征,通过核糖体的保护作用导致抗生素抗性。poxtA基因可降低阳性菌株对酰胺醇类、恶唑烷酮类、四环素类药物的敏感性。poxtA基因常定位于包含两个IS1216元件的复合转座子样结构中,可通过形成环状中间体来携带耐药基因的水平转移。本研究试验菌株是实验室保存的两株poxtA基因阳性的肠球菌,分别是粪肠球菌Fac6和海氏肠球菌Fbc83。试验通过PCR检测、药物敏感性试验、MLST分型、接合试验、电转化试验、质粒稳定性试验、S1-PFGE、Southern blot、全基因组测序等技术手段。探讨了poxtA基因在种属内的水平扩散机制及种属间的跨种传播机制。poxtA基因在种属内水平扩散机制结果显示,粪肠球菌Fac6中poxtA基因可以发生接合转移,接合效率为1.87×10-3。通过MLST分型,接合子的ST分型与受体菌JH2-2一致,均为ST8。证实poxtA基因确实发生接合转移。药敏实验证实接合子T-Fac6对利奈唑胺的MIC提高了 8倍,对氟苯尼考的MIC提高了 32倍。S1-PFGE与Southern blot试验显示:poxtA基因位于质粒上,分子印迹杂交后与S1-PFGE图上质粒位置一致,均定位于质粒。对野生株及接合子三代全基因组学测序结果的分析显示:poxtA基因位于19.8 Kb质粒(pFac6-1)上,其可以通过与101 kb的optrA 阳性接合型质粒(pFac6-2)发生融合,实现接合转移,接合后的质粒(pT-Fac6)大小为121 Kb。融合的机制是在bcrR基因位点发生了同源重组,证实了poxtA基因可在种属内水平转移。poxtA基因跨种传播机制试验结果:PCR检测猪源海氏肠球菌Fbc83为poxtA基因阳性菌株。电转化试验成功获得了两株电转子TJ-Fbc83(以粪肠球菌JH2-2为受体)、TR-Fbc83(以金黄色葡萄球菌RN4220为受体),电转子TJ-Fbc83对氟苯尼考的抗性提高了 16倍,对利奈唑胺的MIC提高了 8倍:电转子TR-Fbc83对氟苯尼考的抗性提高了 32倍,对利奈唑胺的MIC提高了 4倍。质粒稳定性试验证实poxtA基因可以在粪肠球菌和金黄色葡萄球中复制。在金黄色葡萄球菌中需要添加抗生素才可以稳定复制。抗生素撤销的情况下,耐药基因传代至第5代poxtA相关耐药基因随机丢失。Fbc83三代全基因组测序结果显示含有一个 26.7 kb 的质粒 pT-Fbc83,携带有poxtA、fexB、tet(M)+tet(L)。其中,poxtA、fexB、tet(M)+tet(L)基因侧翼区用时含有同向IS1216序列,可以构成串联的转座单位,该结构可以形成多组合环状中间体,提示耐药基因的水平转移与转座单位关联。综上所述,本研究通过对poxtA基因的定位、可转移性及侧翼区的序列分析,揭示了猪源肠球菌中poxtA基因在种属内及种间跨种传播的分子机制,为poxtA基因传播的风险评估提供科学依据。