【摘 要】
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目的:观察电针联合艾灸督脉穴位对大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO/R）后大鼠学习记忆障碍、脑梗死体积、小胶质细胞及TLR4信号通路中Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）和核因子-κB p65（NF-κB p65）表达水平的影响,探讨电针联合艾灸督脉穴位改善MCAO/R大鼠学习记忆障碍的具体机制。方法:选择SPF级雄性SD大鼠100只适应性喂养1周,采用Morris水迷宫筛除先
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目的:观察电针联合艾灸督脉穴位对大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO/R）后大鼠学习记忆障碍、脑梗死体积、小胶质细胞及TLR4信号通路中Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）和核因子-κB p65（NF-κB p65）表达水平的影响,探讨电针联合艾灸督脉穴位改善MCAO/R大鼠学习记忆障碍的具体机制。方法:选择SPF级雄性SD大鼠100只适应性喂养1周,采用Morris水迷宫筛除先天学习和记忆能力障碍的大鼠,剩余SD大鼠随机分为假手术组和造模组。造模组通过线栓法制备左侧MCAO/R学习记忆障碍大鼠模型,术后24h依次使用神经功能评分和水迷宫定位航行实验筛选出造模成功大鼠,并将其随机分为模型组、电针组（电针神庭、百会,30min/次,1次/d,持续14d）、艾灸组（艾灸神庭、百会,30min/次,1次/d,持续14d）和电针联合艾灸组（以下简称针灸联合组,先电针后艾灸治疗）四组。分别于术后24h和治疗14天结束后对各组大鼠进行神经功能评分;利用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习和记忆能力;TTC染色法观察各组大鼠的脑梗死体积;免疫组化法检测大鼠海马区小胶质细胞标志物离子化钙结合适配分子1（Iba1）的表达;运用蛋白质免疫印迹法（WB）检测各组大鼠海马组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65的蛋白含量;采用实时荧光定量PCR（q PCR）技术检测各组大鼠海马组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65的m RNA相对表达水平。结果:1.神经功能评分结果:术后24h各造模组大鼠Zea-Longa评分两两相比均无统计学差异（P＞0.05）;治疗14天结束时,电针组、艾灸组和针灸联合组大鼠评分明显低于模型组（P＜0.05）;接受电针联合艾灸督脉穴位治疗的大鼠ZeaLonga评分明显低于电针组或艾灸组（P＜0.05）;与治疗前相比,治疗后电针组、艾灸组、针灸联合组大鼠的神经功能评分均有明显下降（P＜0.05）。2.水迷宫实验结果:定位航行实验:不同干预方式对各组大鼠逃避潜伏期长短的影响随时间的变化而变化（P＜0.05）。第1天时各组大鼠的逃避潜伏期长短比较无明显差别（P＞0.05）;第2-5天时模型组逃避潜伏期明显高于电针组、艾灸组和针灸联合组（P（day2-5）＜0.05）;实验第3天和第4天,与电针组和艾灸组相比,针灸联合组逃避潜伏期明显缩短,具有统计学差异（P＜0.05）;第5天时,针灸联合组逃避潜伏期数值虽微高于假手术组,但两组之间的逃避潜伏期差异不具有统计学意义（P＞0.05）。空间探索实验:与假手术组相比,除针灸联合组大鼠之外的其余三组大鼠的平台交叉数明显降低（P＜0.05）;与模型组比较,电针组、艾灸组和针灸联合组的平台交叉数均明显增加（均为P＜0.05）,具有统计学意义;与电针组和艾灸组相比,针灸联合组穿越平台次数明显增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）。3.TTC染色结果:假手术组大鼠无梗死灶。与模型组相比,电针组、艾灸组和针灸联合组脑梗死体积明显减小,其中针灸联合组脑梗死体积减小的程度最明显（P＜0.05）。4.免疫组化结果:与假手术组相比,模型组、电针组和艾灸组大鼠海马中Iba1的平均光密度均上调（P＜0.05）;与模型组相比,电针组、艾灸组和针灸联合组大鼠的小胶质细胞多处于静止状态,Iba1平均光密度明显下调（P＜0.05）;其中与电针组和艾灸组相比,针灸联合组的Iba1平均光密度值最低（P＜0.05）,且基本恢复至假手术组水平。5.各组大鼠TLR4通路相关蛋白、基因的表达水平:WB和q PCR结果显示,假手术组大鼠大脑海马内TLR4及其信号通路下游MyD88和NF-κB p65的蛋白和m RNA相对表达量均明显低于模型组、电针组、艾灸组（P＜0.05）;电针组、艾灸组和针灸联合组大鼠的各指标蛋白、m RNA相对表达量均低于模型组（P＜0.05）;而相较于电针组和艾灸组,针灸联合组大鼠的各指标蛋白和m RNA相对表达量最低,且具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.电针联合艾灸督脉穴位的综合干预措施可促进MCAO/R大鼠的神经功能缺损症状改善和学习记忆功能恢复,效果优于电针或艾灸的单一治疗。2.电针联合艾灸督脉穴位的综合干预能减少大脑梗死体积、抑制大脑海马区小胶质细胞活化,减少TLR4及其信号通路下游MyD88和NF-κB p65的蛋白和基因表达,从而发挥减轻缺血再灌注损伤的脑保护作用。
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