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研究背景系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种多器官受累的自身免疫性疾病,是一系列免疫系统内的相互作用关系的紊乱导致的结果。SLE的病因和发病机制至今未明,可能与遗传、感染、环境、性激素、药物等因素有关,其发病机制涉及T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞及补体系统等多个免疫组分的异常。目前认为免疫系统中淋巴细胞异常活化是SLE发病、病情进展和预后的关键。已有研究表明,辅助性T细胞(T help cells,Th)产生的细胞因子在SLE及其它自身免疫性疾病的发病机制中起着重要作用。活化的自身反应性辅助性T细胞促使B细胞分化、产生自身抗体[5],包含自身抗体的免疫复合物和炎性辅助性T细胞导致组织和器官的损伤。早在1986年,Momann和Coffman[6]就提出了Th1/Th2细胞亚群假说,根据细胞分化、功能特征和细胞因子分泌的不同,将特异性CD4+Th细胞分成Th1细胞和Th2细胞两个亚群,并形成了理解CD4+T细胞免疫生物学、固有免疫和适应性免疫调节的理论框架。Th1细胞主要分泌白细胞介素(interleukin,IL)2、γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ),由IL-12诱导分化而来,功能是增强细胞免疫效应。Th2细胞的分化则依赖于IL-4,主要分泌IL-4、IL-5、IL-9和IL-13,它在体液免疫应答中发挥重要作用。Th1型免疫反应失调,可出现组织损伤和慢性炎症,而Th2型免疫反应失调,则可致哮喘和过敏[7,8]。长久以来,多数学者认为,是Th1/Th2之间的比例失衡导致自身免疫性疾病的发病[9]。早期的研究表明SLE是一种Th2细胞发生极化的疾病,能特异性产生针对自身抗原的自身抗体[10]。也有研究表明,SLE患者的Th1细胞的反应也是增强的,包括IL-2、IFN-γ等的升高[11]。过去人们普遍认为在T细胞介导的免疫反应过程中,主要由Th1细胞和Th2细胞主导[12,13]。近年来,随着一个新的T细胞亚群-Th17细胞的发现,以往建立的Th1/Th2理论发生重大变化。Th17细胞是人类在研究自身免疫性疾病动物模型如实验性自身免疫性脑脊髓炎[14](experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)和胶原诱导的关节炎[15](collageninduced arthritis,CIA)时发现的一群新的CD4+T细胞。现在认为Th17细胞是由一独立的CD4+T细胞亚群所分泌的,这类细胞代表了一类不同于传统的Th1细胞或Th2细胞的前炎症性辅助性T细胞谱系,它们不表达IFN-γ或IL-4,却高表达IL-17,因此被命名为Th17细胞[16]。Th17细胞主要在介导防御胞外病原微生物的感染、慢性炎症以及自身免疫性疾病中发挥重要作用,是目前的研究热点之一。目前认为,IL-23/Th17轴是自身免疫性疾病的核心因子,在自身免疫性疾病中的发生、发展中起着关键作用。Th17细胞在SLE发病中的作用已成为国内外研究的热点之一。诸多研究表明,Th17细胞可能是SLE的关键效应细胞,而IL-17及其他相关细胞因子在SLE的发生、发展中也具有重要的影响和作用。SLE大多需要激素、免疫抑制剂及其他抗风湿药物的长期控制,但其诸多毒副作用限制了其临床应用。白芍总苷(total glucosides ofpaeony,TGP)因其疗效好、无明显不良反应,已被用于SLE的治疗。SLE作为常见的自身免疫性疾病,目前,关于Th17细胞及其相关细胞因子在SLE患者中的研究较少,观点也不一致。而关于TGP对SLE患者Th17细胞及其相关细胞因子的影响的研究则未见报道。TGP是否可通过对Th17细胞的调节发挥抗炎和免疫调节作用,Th17细胞是否为TGP治疗的靶细胞是一个值得研究的问题。因此,本研究观察了TGP治疗前后SLE患者外周血Th17细胞表达水平的变化及其与SLE临床的相关性及临床意义;还观察了经TGP治疗前后Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-23在SLE患者血浆中表达水平的比较,以期探讨TGP治疗SLE时对Th17细胞的调控作用,探讨TGP治疗SLE的免疫学机制。目的(1)观察TGP对SLE患者外周血Th17细胞表达水平的影响,以探讨Th17细胞在SLE致病机理中发挥的作用及其与临床的相关性。(2)观察TGP对SLE患者Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-23水平的影响,以期进一步探讨Th17细胞及其相关细胞因子(IL-17、IL-23)在SLE致病机理中发挥的作用及TGP治疗SLE的作用机制。方法选择2010年3月~2011年9月于我院住院的SLE患者60例,随机分为TGP组和对照组,全部符合1982年美国风湿病学会(American College of Rheumatology,ACR)修订的SLE分类标准,根据SLE疾病活动指数评分(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)标准计算SLEDAI评分。具有下列情况之一者不列入研究范围:严重心、肺、肝、肾等重要脏器及血液、内分泌系统病变,妊娠及哺乳期妇女,慢性感染病史,近期感染,药物过敏及过敏体质者,应用TGP之前1个月使用细胞毒免疫抑制剂和伴有其他风湿性疾病者(如类风湿关节炎、干燥综合征、混合性结缔组织病等)。患者一般情况为:TGP组30例,均为女性,年龄18~45岁,平均年龄(26.87±7.10)岁;对照组30例,均为女性,年龄18~45岁,平均年龄(26.87±7.12)岁。TGP组:采用临床常规治疗方法加用TGP治疗,TGP剂量为0.6g,2/日,疗程60天;对照组:采用临床常规治疗方法。所有患者分别于第0天和第60天晨起空腹抽取外周静脉血。(1)SLE患者外周血中Th17细胞表达水平的检测:采用流式细胞术分别检测两组患者治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)Th17细胞表达水平,并分析治疗前后差异。(2)SLE患者Th17细胞相关细胞因子(IL-17、IL-23)的检测:采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测两组患者治疗前后血浆IL-17、IL-23的水平,并分析治疗前后差异。应用SPSS13.0统计软件进行统计学分析,检测数据用均数±标准差(x±s)表示,采用独立样本t检验、配对样本t检验和双变量相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)两组患者治疗前后PBMC Th17细胞表达水平、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23水平的变化对照组患者PBMC Th17细胞表达率、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23水平治疗前后均有显著差异(t值分别为4.560,4.871,11.826,8.706;P值均<0.001),治疗后的PBMC Th17细胞表达率、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23水平显著低于治疗前。TGP组患者PBMC Th17细胞表达率、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23水平治疗前后均有显著差异(t值分别为6.949,7.851,14.770,11.345;P值均<0.001),治疗后的PBMC Th17细胞表达率、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23水平显著低于治疗前。(2)两组患者治疗前后PBMC Th17细胞表达水平、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23水平变化的比较TGP组与对照组患者治疗后PBMC Th17细胞表达率、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23下降水平有显著差异(t值分别为2.112,2.210,2.450,2.130;P值分别为0.039,0.031,0.017,0.037),TGP组治疗后的PBMC Th17细胞表达率、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23水平下降值显著高于对照组。(3)两组患者治疗前PBMC Th17细胞表达水平及血浆IL-17、IL-23水平与治疗前SLEDAI评分的相关性分析对照组患者治疗前PBMC Th17细胞表达率、血浆IL-17水平、IL-23水平与SLEDAI评分均无显著性关联(r值分别为-0.073,0.123,0.103;P值分别为0.703,0.519,0.588);TGP组患者治疗前PBMC Th17细胞表达率、血浆IL-17水平、IL-23水平与SLEDAI评分也无显著性关联(r值分别为-0.005,0.052,0.042;P 值分别为 0.980,0.783,0.826)。(4)两组患者治疗后PBMC Th17细胞表达水平及血浆IL-17、IL-23水平与治疗后SLEDAI评分的相关性分析对照组患者治疗后PBMC Th17细胞表达率与SLEDAI评分无显著性关联(r值为0.353;P值为0.055),血浆IL-17水平、IL-23水平与SLEDAI评分均呈正直线相关(r值分别为0.711,0.712;P值均<0.001);TGP组患者治疗后PBMC Th17细胞表达率、血浆IL-17水平、IL-23水平与SLEDAI评分均呈正直线相关(r 值分别为 0.449,0.772,0.808;P 值分别为 0.013,<0.001,<0.001)。(5)两组患者治疗前后血浆IL-17和IL-23水平的相关性分析对照组患者治疗前血浆IL-17与IL-23水平无显著性关联(r值为-0.196;P值为0.299),治疗后血浆IL-17与IL-23水平呈正直线相关(r值为0.743;P值<0.001);TGP组患者治疗前血浆IL-17与IL-23水平无显著性关联(r值为-0.314;P值为0.091),治疗后血浆IL-17与IL-23水平呈正直线相关(r值为0.799;P 值<0.001)。结论SLE患者经过TGP治疗后Th17细胞表达率、SLEDAI积分、血浆IL-17及IL-23水平显著降低,提示:①Th17细胞在SLE的发病中可能起着重要作用,Th17细胞及相关细胞因子可能参与SLE发生发展的病理生理过程,针对Th17细胞的生物靶向治疗也许可以作为治疗SLE的新的有效方法;②TGP可能通过IL-23/Th17轴而发挥作用达到治疗SLE的目的。