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目的:康艾注射液（Kangai Injection,KAI）作为临床上常见的中药抗癌注射剂,为黄芪、人参及苦参素提取物。康艾注射液除了具有治疗多种原因引起的细胞低下及减少症、慢性乙型肝炎等作用,还可联合化疗药物用于治疗原发性肝癌、肺癌、直肠癌等恶性肿瘤,但其抗肿瘤机制尚不明确。本研究将亲本人肺腺癌细胞株（A549）与人肺腺癌顺铂耐药细胞株（A549/DDP）作为模式细胞,从转录因子FOXO3a依赖性自噬途径探讨康艾注射液改善人肺腺癌细胞顺铂耐药性的分子机制,为中药辅助性治疗恶性肿瘤提供实验依据,同时为肿瘤耐药机制的研究提供创新性思路。材料与方法:1.实验材料人肺腺癌细胞株（A549）及人肺腺癌顺铂耐药细胞株（A549/DDP）购自中国医学院肿瘤研究中心。康艾注射液（长白山制药股份有限公司,中国,生药浓度400 mg/m L）,顺铂（Sigma公司,美国,10 mg）。2.实验方法将细胞培养箱设置为37℃、95%湿度、5%CO2,用以培养A549及A549/DDP细胞,待细胞达70-80%融合时,经预热0.25%胰蛋白酶消化后,加入含10%FBS及1%双抗（青霉素和链霉素）新鲜Mc Coy’s 5A培养液进行传代。将A549/DDP细胞置于1μM浓度的顺铂新鲜培养基培养,以维持细胞耐药性。（1）利用CCK-8法检测亲本A549与顺铂耐药A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;免疫印迹法检测A549和A549/DDP细胞自噬相关蛋白表达差异性。（2）顺铂联合不同浓度康艾注射液干预A549/DDP细胞,实验分组如下:对照组（0μM Cisplatin+0 mg/m L KAI）、顺铂单独作用组（10μM Cisplatin+0 mg/m L KAI）、康艾注射液单独作用组（0μM Cisplatin+55 mg/m L KAI）、顺铂+低浓度康艾注射液组（10μM Cisplatin+20 mg/m L KAI）、顺铂+中浓度康艾注射液组（10μM Cisplatin+35 mg/m L KAI）、顺铂+高浓度康艾注射液组（10μM Cisplatin+55 mg/m L KAI）。1)CCK-8法分别测定A549/DDP细胞对康艾注射液的IC50值及耐药指数、顺铂联合不同浓度康艾注射液对A549/DDP细胞增殖的影响;2)康艾注射液联合顺铂干预A549/DDP细胞诱导细胞自噬性死亡:免疫荧光法观察LC3荧光斑点数量变化;免疫印迹法检测自噬相关蛋白Beclin 1、LC3Ⅱ及p62表达水平;自噬抑制剂实验观察细胞死亡情况;3)康艾注射液联合顺铂干预A549/DDP细胞诱导细胞凋亡:流式细胞仪观察细胞周期阻滞及细胞凋亡情况;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞核变化;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax和B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）及p53蛋白表达水平;凋亡抑制剂实验观察A549/DDP细胞死亡情况;4)FOXO3a参与康艾注射液联合顺铂诱导A549/DDP细胞凋亡和自噬性细胞死亡情况:在线数据库Kaplan-Meier Plotter分析肺腺癌患者FOXO3a基因表达与患者生存期的相关性;免疫印迹法检测FOXO3a蛋白表达与磷酸化水平;免疫荧光法观察FOXO3a核定位情况;沉默FOXO3a基因,免疫印迹法检测自噬及凋亡相关蛋白表达水平。结果:1.与亲本A549细胞比较,顺铂耐药的A549/DDP细胞基础自噬水平升高。2.康艾注射液具有增强A549/DDP细胞顺铂敏感性的作用。3.康艾注射液联合顺铂干预A549/DDP细胞,可诱导细胞自噬荧光斑点增加;上调自噬相关蛋白Beclin 1、LC3Ⅱ表达,下调p62表达;诱导细胞自噬性死亡,从而改善A549/DDP细胞顺铂耐药性。4.康艾注射液联合顺铂干预A549/DDP细胞,可诱导细胞发生G2/M期阻滞,激活促凋亡蛋白Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2;并上调Cleaved caspase-3及p53蛋白表达水平,从而增强A549/DDP细胞顺铂敏感性。5.康艾注射液联合顺铂干预A549/DDP细胞,通过上调FOXO3a表达、降低FOXO3a磷酸化,诱导细胞自噬性死亡及凋亡。结论:康艾注射液联合顺铂干预人肺腺癌顺铂耐药A549/DDP细胞,可通过诱导FOXO3a依赖性细胞自噬性死亡及凋亡,从而改善A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。