【摘 要】
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目的:探讨不同干预措施对大鼠慢性难愈合创面细胞焦亡相关因子Caspase-1和IL-18表达的影响,完善皮肤再生医学技术在慢性难愈合创面中的作用机制,为临床应用及推广提供更多的理论依据。方法:（1）取健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组（Blank）、急创组（Acute）、美宝组（MEBO）、贝复济组（rb-b FGF）、
【基金项目】
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国家自然科学基金（No 81860852）； 广西自然科学基金（No 2017GXNSFAA198321）； 广西特聘专家专项资助（桂人才通字[2019]13号）； MEBT/MEBO对慢性难愈合创面修复中表皮细胞行为调控机制研究,国家自然科学基金面上项目（81774327）；
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目的:探讨不同干预措施对大鼠慢性难愈合创面细胞焦亡相关因子Caspase-1和IL-18表达的影响,完善皮肤再生医学技术在慢性难愈合创面中的作用机制,为临床应用及推广提供更多的理论依据。方法:（1）取健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组（Blank）、急创组（Acute）、美宝组（MEBO）、贝复济组（rb-b FGF）、模型组（Model）,每组18只。其中空白组仅做背部脊柱两侧备皮处理,急创组直接进行背部皮肤剪除,建立急性损伤模型,并湿敷生理盐水纱布,其余三组大鼠制备慢性难愈合创面模型,分别用湿润烧伤膏、贝复济,生理盐水湿敷创面治疗。造模后第3、7、14天分别切取创面肉芽组织,部分置于甲醛液及电镜液中固定,待病理HE染色,免疫荧光及电镜实验时取用。其余创面标本置于-80℃冰箱,用于Western Blotting和Real-Time PCR检测,对比各组大鼠创面IL-18及Caspase-1蛋白表达情况及mRNA转录水平。结果:（1）创面愈合情况:治疗后第3天,各组大鼠创面愈合率比较差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗后第7天和第14天,急创组、贝复济组、美宝组大鼠创面愈合率和模型组比较均明显升高（P＜0.05）,美宝组与贝复济组比较无差异（P＞0.05）。急创组在第14天愈合效果最好。（2）HE染色情况:急创组、贝复济组、美宝组的组织形态学结构均优于模型组。（3）电镜观察情况:电镜观察显示模型组、美宝组中均存在细胞胀大、细胞破损、胞液稀疏、着色较浅、胞膜不连续,膜孔形成的细胞焦亡特征。（4）免疫荧光染色结果:Caspase-1在造模后第3天的急性组、贝复济组、美宝组,模型组中均有不同程度表达,其中模型组表达明显;造模后第7天和第14天,其余各组表达均明显减少,而模型组相对其他组仍然明显表达。（5）Western Blotting和Real-Time PCR检测情况:（1）治疗后第3、7、14天,空白组各时间点IL-18蛋白表达水平无明显变化,P＞0.05,差异无统计学意义;急创组、贝复济组、美宝组、模型组:大鼠创面组织内IL-18蛋白表达水平先升高后降低;各组对比情况:第3天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异P＜0.05,急创组、贝复济组、美宝组两两比较无统计学差异。第7天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异,急创组、贝复济组、美宝组组间两两比较无统计学差异。第14天:空白组和急创组比较无统计学差异P＞0.05,空白组和美宝组比较,空白组和贝复济组比较,空白组和模型组比较均有统计学差异P＜0.05。模型组和其余四组比较均有统计学差异P＜0.05。急创组、贝复济组、美宝组组间两两比较无统计学差异P＞0.05。其中模型组在第14天时表达水平为各组最高,急创组表达水平除空白组外最低。IL-18mRNA转录水平趋势大体和IL-18蛋白表达一致。（2）治疗后第3、7、14天,空白组各时间点Caspase-1蛋白表达水平无明显变化,P＞0.05,差异无统计学意义;模型组各时间点Caspase-1蛋白表达水平无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）;急创组,贝复济组,美宝组第14天较第7天下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;各组对比情况:第3天:空白组、模型组和其余四组比较均有统计学差异P＜0.05,急创组、贝复济组、美宝组组间两两比较无统计学差异P＞0.05。第7天:空白组、模型组和其余四组比较均有统计学差异,急创组、贝复济组、美宝组组间两两比较无统计学差异P＞0.05。第14天:空白组和急创组、美宝组、贝复济组比较均无统计学差异P＞0.05。其中模型组在第14天时表达水平为各组最高,和其余四组比较均有统计学差异P＜0.05。Caspase-1mRNA转录结果呈现的趋势大体上和Caspase-1蛋白表达水平一致。结论:（1）MEBT/MEBO可减少大鼠慢性难愈合创面组织中Caspase-1/IL-18的表达,减少炎症反应,促进慢性难愈合创面的愈合,愈合过程涉及创面细胞焦亡。（2）MEBT/MEBO对慢性创面的愈合效果与使用贝复济作用相当,可能与MEBO含有多种抗炎成分,抑制促炎因子的释放有关。
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