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目的:探讨免疫刺激调控自闭症谱系障碍(Autism spectrum disorder,ASD)相关基因Pten(双蛋白脂质/磷脂酶,phosphatase and tensin homolog on chromosome ten)单拷贝缺失导致的小鼠ASD相关行为,从而验证环境因素与遗传因素的相互作用在ASD发病机制中的重要性,为ASD患者的早期临床诊断和早期治疗提供新的思路。 方法:1)建立转基因小鼠模型:将Balb/c背景Ptenloxp/loxp小鼠与B6背景野生型(Wild,WT)小鼠交配(Balb/c背景小鼠本身带有自闭症样行为倾向,与WT小鼠杂交淡化Balb/c背景),获得的F1代Ptenloxp/+小鼠,继续与B6背景WT小鼠交配直至第五代(Balb/c背景已经基本淡化,可用于各种实验),之后为了研究中枢神经系统(central neuron system,CNS)中Pten基因的作用,我们将F5代Ptenloxp/+小鼠与CamkⅡ-Cre+/+工具鼠交配,使CNS Pten基因单拷贝缺失从而获得两种基因型小鼠,分别是Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre+小鼠与Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre-小鼠,其中Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre+为实验组,Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre-为对照组(具体详见正文实验方法)。 2)药物处理:模拟孕期免疫刺激,实验组和对照组分别于孕期第14天(Embryonic day14,E14)腹腔注射聚集胞苷(Polycytidylic acid,PolyI∶C)和生理盐水(Normal Saline,NS),由此操作产生四个不同的组分别为Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre+(PolyI∶C: E14)、Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre+(NS∶ E14)、Ptenloxp/+;CamkⅡ-Cre-(PolyI∶C: E14)、Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre-(NS∶ E14)。确定出生后免疫刺激的作用,实验组和对照组分别于出生后第10天(Postnatal day10,P10)和(或)E14腹腔注射PolyI∶C和NS,由此操作我们另外增加四组进行比较,分别是Ptenloxp/+;CamkⅡ-Cre+(PolyI∶C: E14+P10)、Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre+(PolyI∶C: E14)、Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre-(PolyI∶C: E14+P10)、Ptenloxp/+; CamkⅡ-Cre-(PolyI∶C: E14)。 3)行为学实验:小鼠4-6周,根据人ASD的主要症状,我们比较了以上不同组小鼠之间的一系列ASD相关行为的差异,包括理毛实验(连续5天,每次20分钟)、三箱社交行为实验(5分钟的基础值检测,之后再5分钟的社交行为检测)、惊跳反射(五种声音强度:75dB、80dB、90dB、100dB和120dB)和前脉冲抑制(三种前脉冲声音刺激:PP75 dB、PP80 dB、PPB dB)、视敏度测试(空间频率为0.03、0.13、0.26、0.52和1.25,于明场和暗场的转头次数)(具体详见正文实验方法)。 结果:孕期免疫刺激能够造成小鼠产生ASD相关行为;出生后的免疫刺激并不会加剧孕期免疫刺激引起的小鼠ASD相关行为;CNS Pten基因单拷贝缺失能够易化孕期免疫刺激对小鼠产生ASD相关行为。 结论:孕期免疫刺激能够调控CNS Pten基因单拷贝缺失导致的小鼠ASD相关行为。