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目的:运用网络药理学方法研究养阴清肺汤加味治疗重症肺炎支原体肺炎(SMPP)的作用机制,应用养阴清肺汤加味干预治疗重症肺炎支原体肺炎小鼠,探讨养阴清肺汤加味对高载量MP滴鼻诱导的重症肺炎支原体肺炎BALB/c小鼠模型的肺上皮间质转化及相关炎症通路NF-κB/IL-6表达的影响,进一步阐明养阴清肺汤加味干预治疗重症肺炎支原体肺炎的作用机制及靶点。材料与方法:通过TCMSP数据库、TCMID数据库以及Swiss Target Prediction收集养阴清肺汤加味10味中药的化合物及有效靶点,借助Gene Cards数据库筛选重症肺炎支原体肺炎预测靶点,与中药的有效成分靶点进行Venny分析,确定交集靶点的靶向关系;通过Cytoscape3.7.2软件构建药方-化合物成分-关键靶点网络图;利用String数据库构建关键靶蛋白互作(PPI)网络图;最后分别运用Metascape数据库以及DAVID数据库进行基因功能的GO分析和KEGG通路富集分析。下一步实验,选取BALB/c小鼠120只,随机分为正常组、模型组、阿奇霉素组、中药组、中西医结合组,每组24只,除正常组以外均滴鼻0.1m L高载量1010CCU/m L MP菌液,建立SMPP模型。各组小鼠分别于感染MP后的第3、7、10、14天随机处死6只小鼠进行眼球取血及标本取材。观察小鼠的一般状态,测量小鼠的体温变化。采用HE染色法观察小鼠的肺部病理情况,ELISA方法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)的表达;Western blotting检测小鼠肺组织NF-κB蛋白表达,q PCR法对肺组织中E-钙黏蛋白(E-cad)、神经钙黏蛋白(N-cad)基因含量进行测定。结果:1.筛选获得179个活性化合物,药物靶点786个,疾病靶点277个,交集靶点75个。PPI网络涉及75个蛋白质节点,关键靶点包括IL6,GAPDH,VEGFA,TP53,TNF,JUN,CXCL8,PTGS2,IL10,STAT3,EGFR,TLR4,MYC,MMP9,CASP3,MAPK1,IL1B,FN1,CRPHMOX1;GO富集功能分析主要与细胞的调节、细胞运动的调控、血管的生成发育、细胞因子、生长因子受体结合及细胞器、细胞膜等有关;KEGG通路30条,与养阴清肺汤加味抗SMPP密切相关的通路有NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路、TNF信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、NOD样受体信号通路、HIF-1信号通路等。2.病理结果显示模型组小鼠细支气管壁增厚,肺泡结构破坏严重,气管上皮脱落,肺泡间隔明显增宽,大量炎性细胞渗出,肺组织毛细血管淤血,肺泡、肺泡管等结构消失;阿奇霉素组小鼠与模型组相比,炎细胞数量明显改善,少量炎性细胞浸润;中药组小鼠肺泡内仅有少量炎性细胞,中度肺组织淤血,水肿,中西医结合组小鼠肺泡内有少量炎性细胞,肺泡间隔增厚,与模型对照组相比较充血现象轻。在感染后,小鼠的病理评分,与正常组相比,其余各组均升高,并于感染后第7天到达峰值;小鼠的体温变化,与正常对照组相比,于第7天体温到达顶峰;与模型组相比,各给药组第7天开始下调(P<0.05)。3.高载量MP感染后,用ELISA法检测血清中IL-6表达。与正常组相比较,各时间点小鼠血清中IL-6均升高(P<0.05),于第7天到达峰值;与模型组比较,三给药组小鼠血清中IL-6水平均有所降低(P<0.05);但中药组降低水平不明显,阿奇霉素组和中西医结合组降低水平较明显,表明三给药组均可抑制小鼠血清中IL-6表达;给药第7天,中西医结合组疗效优于阿奇霉素组和中药组(P<0.05),给药第10、14天,中西医结合组与阿奇霉素组比较差异不明显(P>0.05),但与中药组比较均优于中药组(P<0.05),表明养阴清肺汤加味联合阿奇霉素效果更佳。4.Western blotting检测小鼠肺组织NF-κB蛋白表达结果:MP感染后,与正常组比较,各时间点小鼠血清中NF-κB均升高(P<0.05),于第3天达到峰值,然后逐渐降低;药物干预后,与模型组比较,在第7天时开始起效,三给药组小鼠血清中NF-κB水平均有所降低(P<0.05),在第10、14天时中西医结合组优于阿奇霉素组和中药组(P<0.05)。5.q PCR法检测小鼠肺组织中的E-cad、N-cad m RNA的表达结果显示:MP感染后,各时间点小鼠E-cad m RNA表达均下降,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。药物干预后,与模型组比较,第3天,第7天各给药组作用不明显(P>0.05);于第10天各给药组开始起效,但三给药组之间无差异(P>0.05),但在第14天,中西医结合组治疗作用优于中药组和阿奇霉素组(P<0.05);MP感染后,各时间点小鼠N-cad m RNA表达均上升,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。药物干预后,与模型组比较,第3天各给药组作用不明显(P>0.05),第7天中西医结合组开始起效,但阿奇霉素组和中药组未起效;于第10天各给药组均起效,但三给药组之间无明显差异(P>0.05);在第14天,中西医结合组治疗作用优于中药组和阿奇霉素组(P<0.05)。结论:1.养阴清肺汤加味中的槲皮素、汉黄芩素、芦荟大黄素等成分很可能通过IL6、TNF、IL10、TLR4、MAPK1、IL1B、CRP等靶点作用于NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路、TNF信号通路、MAPK信号通路等多条信号转导通路从而发挥抗炎的作用。2.养阴清肺汤加味可通过干预肺上皮间质转化来减轻重症肺炎支原体肺炎肺纤维化进程,可能为治疗SMPP的靶点。3.养阴清肺汤加味能够有效的减轻SMPP小鼠的肺组织炎症,可能与抑制NF-κB/IL-6炎症信号通路有关,且联用阿奇霉素效果更佳。