背景:生脉方是我国古代中药名方,由人参、麦冬和五味子三味中药组成。生脉方常用制剂包括生脉散、生脉饮、生脉注射液等,主治气阴两虚之症,更有益气养阴之功效。课题组前期选择生脉方中12种已知效应成分研究发现,人参皂苷Re和人参皂苷Rd是OAT1的潜在抑制剂;人参皂苷Re是NTCP的潜在底物;五味子醇乙在细胞和囊泡水平上都会产生基于BCRP介导的相互作用;这些研究提示上述转运体介导了生脉方中主要效应成分的转运过程。有机阳离子转运体2（OCT2）是一种在肾脏中表达较高的摄取转运体,在药物的肾脏消除中发挥了重要作用,生脉方中的主要效应成分经OCT2介导的摄取转运及相互作用机制尚不清楚,值得关注与探索。此外,中药复方的临床疗效是药效物质组共同作用的结果,我们应同时基于中医药“整体观”思想,从药效物质组整体给药的角度去关注中药复方制剂诸多组分共存时的转运过程及其相互影响,全面揭示中药复杂组分基于肝肾转运体介导的相互作用及配伍机制。目的:通过构建稳定表达OCT2的细胞模型,研究探索生脉方中15种主要效应单体成分给药后经OCT2介导的摄取转运及其相互作用;同时选取人参总皂苷和五味子总木脂素两个药效物质组,研究探索生脉方主要药效物质组给药后主要效应成分经NTCP、OCT2、OAT1和BCRP介导的转运及相互作用情况;以及主要药效物质组配伍前后相关效应成分在大鼠体内的排泄情况及其药代动力学变化,从药代动力学和药效物质组学角度,科学诠释生脉方主要药效物质组基于肝肾转运体介导的相互作用机理及配伍机制,为生脉方的临床安全及合理使用提供理论与实验依据。方法:1、建立稳定、灵敏、可靠的LC-MS分析方法,用于检测生脉方中15种主要效应成分在细胞、大鼠血浆、胆汁和尿液等基质中的浓度。2、利用MDCK-OCT2和MDCK-MOCK细胞模型,研究生脉方中15种主要效应单体成分给药后经OCT2介导的摄取转运及相互作用。3、利用分别稳定表达NTCP、OCT2、OAT1和BCRP的细胞模型,研究生脉方中主要药效物质组（人参总皂苷和五味子总木脂素）给药后主要活性成分经上述转运体介导的转运及相互作用情况。4、利用大鼠在体模型,研究生脉方主要药效物质组（人参总皂苷和五味子总木脂素）配伍给药前后目标成分经大鼠胆汁和尿液的排泄情况及其药代动力学变化。结果:1、本实验室建立的用于检测生脉方主要效应成分在不同基质中的LC-MS定量分析方法,其特异性、精密度和准确度等方面均符合生物样本分析的相关要求。2、在稳定表达OCT2的细胞模型中,生脉方中主要效应单体成分给药后人参皂苷Rb1与甲基麦冬二氢高异黄酮A（MA）在MDCK-OCT2细胞中的摄取量明显高于MDCK-MOCK细胞,OCT2抑制剂可明显抑制人参皂苷Rb1、MA在MDCK-OCT2细胞中的摄取。同时研究发现,人参皂苷Rd、Re和五味子乙素可抑制MDCK-OCT2细胞对其底物ASP+的的摄取,在浓度10μM时,分别抑制OCT2转运活性的47%、56%和21%。在相互作用研究中发现,人参皂苷Rd、Re可以抑制人参皂苷Rb1经OCT2的摄取,人参皂苷Re和五味子乙素对OCT2介导的MA的摄取没有明显影响。3、在稳定表达NTCP、BCRP、OCT2和OAT1的细胞模型中,通过主要药效物质组（人参总皂苷和五味子总木脂素）给药后的转运实验发现,NTCP介导了人参皂苷Re的摄取转运,OCT2介导了人参皂苷Rb1、Rd的摄取转运,BCRP介导了五味子甲素、乙素的的外排转运。五味子总木脂素对NTCP介导的人参总皂苷中Re的摄取以及OCT2介导的人参总皂苷中Rb1、Rd的摄取有抑制作用。4、在大鼠体内,主要药效物质组（人参总皂苷和五味子木脂素）配伍给药后,会显著提高人参皂苷Re、Rb1和Rd的AUC0-∞并降低它们的CL,五味子乙素在配伍给药后4 h胆汁中累计排泄量显著减少,人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd在配伍给药后8 h尿液中累计排泄量显著降低。结论:1、基于生脉方主要效应单体成分给药研究提示,人参皂苷Rb1和甲基麦冬二氢高异黄酮A可能是转运体OCT2的潜在底物,人参皂苷Re、人参皂苷Rd和五味子乙素对OCT2介导的ASP+摄取有显著的抑制作用,可能是OCT2的潜在抑制剂,临床上有可能发生基于OCT2介导的药物相互作用。2、基于生脉方药效物质组给药研究提示,NTCP、BCRP、OCT2等肝肾转运体介导了生脉方主要药效物质组中人参皂苷Re、Rb1、Rd及五味子甲素、乙素的转运过程。人参总皂苷和五味子总木脂素配伍给药后,人参皂苷Rb1、Rd、五味子乙素等主要活性成分会发生基于转运体介导的竞争抑制进而影响其排泄过程及其药代动力学。生脉方主要药效物质组间存在基于肝肾转运体网络介导的相互作用及配伍机制。