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玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是一种具有雌激素样活性的真菌毒素,具有生殖毒性和免疫毒性,对动物健康及食品安全造成严重威胁。细胞凋亡、氧化损伤、免疫抑制是ZEN毒性作用的重要病理学基础,研究发现壳聚糖和硒都能够提高机体的抗氧化能力,并改善机体的免疫功能。壳聚糖硒是一种新型的有机硒,能够同时发挥壳聚糖和硒的双重作用。因此,本试验从体外和体内两方面研究壳聚糖硒拮抗ZEN毒性的作用效果,并从氧化损伤和细胞凋亡的角度探索其拮抗ZEN毒性作用的机理,以期为壳聚糖硒的推广应用提供理论依据与技术支持。试验包括以下几部分内容:1.建立体外培养猪子宫内膜上皮细胞的方法。利用组织块法分离,纯化、培养子宫内膜上皮细胞。结果显示:组织块法分离得到的子宫内膜上皮细胞,呈亮球形,活性大;经差时消化法纯化后的细胞,形态正常,呈“铺路石样”生长,其生长曲线呈双“S”形;通过RT-PCR方法检测了上皮细胞内特有的Cytokeratin 18的存在,证实培养的细胞为子宫内膜上皮细胞。2.壳聚糖硒体外拮抗ZEN毒性作用的研究。试验分为5组,即对照C组、ZEN组、ZEN-0.5Se组（0.5μmol/LSe+ZEN）、ZEN-1.5Se组（1.5μmol/LSe+ZEN）和ZEN-3Se（3μmol/LSe+ZEN）组;测定各组细胞内抗氧化酶活性及GPX-1、TNF-α、ERα、ERβ、Bax及Bcl-2 m RNA的表达。结果显示,ZEN组T-AOC和GSH-Px活性极显著低于C组（P＜0.01）,ZEN-1.5Se组和ZEN-3Se组T-AOC活性极显著高于ZEN组（P＜0.01）,ZEN-3Se组SOD活性极显著高于ZEN组（P＜0.01）,ZEN-1.5Se组和ZEN-3Se组MDA含量显著低于ZEN组（P＜0.05）;ZEN组ERβ和Bcl-2 m RNA表达量显著低于对照组（P＜0.05）,GPX-1和TNF-αm RNA表达均低于对照组但差异未达显著水平（P＞0.05）,而Bax m RNA表达极显著高于对照组（P＜0.01）;ZEN-1.5Se组和ZEN-3Se组GPX-1m RNA表达显著高于ZEN组（P＜0.05）,ZEN-3Se组TNF-α、ERβm RNA表达显著高于ZEN组（P＜0.05）;ZEN-0.5Se组、ZEN-1.5Se组和ZEN-3Se组Bax m RNA表达极显著低于ZEN组（P＜0.01）。结果表明,不同浓度的壳聚糖硒对培养液中添加ZEN的子宫内膜上皮细胞内T-AOC、GSH-Px和SOD活性均表现出提高的作用效果或作用趋势;不同浓度的壳聚糖硒对培养液中添加ZEN的子宫内膜上皮细胞内GPX-1、TNF-α和ERβm RNA的表达水平表现出提高的作用趋势（0.5μmol/LSe和1.5μmol/LSe）或效果（3μmol/LSe）;而对bax m RNA的表达水平表现出降低的作用效果。3.壳聚糖硒对日粮中添加ZEN小鼠生长性能、血液生化、抗氧化功能以及雌二醇含量影响的研究。60只雌性小鼠均分对照组、ZEN组、ZEN-Se1组、ZEN-Se2组和ZEN-Se3组,分别饲喂基础日粮、添加2 mg/kg ZEN的基础日粮、添加2 mg/kg ZEN和0.2 mg/kg Se的基础日粮、添加2 mg/kg ZEN和0.4 mg/kg Se的基础日粮和添加2 mg/kg ZEN和0.6 mg/kg Se的基础日粮,试验30 d。试验结束后测定日粮消耗、增重、血液生化指标、血液、肝脏、肾脏抗氧化酶活性及血清Ig A、Ig M、Ig G、IFN-γ、IL-2及E2的含量。结果表明,壳聚糖硒对饲喂含ZEN日粮小鼠的生长性能无影响;高浓度（0.6 mg/kg）的壳聚糖硒可降低饲喂ZEN日粮小鼠血浆中AST含量;壳聚糖硒可提高饲喂ZEN日粮小鼠血液、肝脏和肾脏抗氧化能力;壳聚糖硒可降低饲喂ZEN日粮小鼠血清中E2含量。4.壳聚糖硒对日粮中添加ZEN小鼠基因表达影响的研究。试验分组及动物处理同试验3。无菌采集小鼠肝脏和子宫组织,利用q PCR方法测定小鼠肝脏组织中IFN-γ、IL-2、CYP3A11、3α-HSD、3β-HSD m RNA和子宫组织中ERα、ERβm RNA的相对表达量。结果显示:ZEN-Se3组肝脏组织中IFN-γ和IL-2 m RNA表达量均极显著高ZEN组（P＜0.01）;ZEN-Se2组和ZEN-Se3组肝脏CYP3A11 m RNA表达量均极显著高ZEN组（P＜0.01）;ZEN-Se3组肝脏3α-HSD、3βHSD m RNA表达量显著或极显著低于ZEN组（P＜0.05或P＜0.01）;ZEN组小鼠子宫组织中ERαm RNA表达量极显著高于C组（P＜0.01）,而ERβm RNA表达量显著低于对照组（P＜0.05）;ZEN-Se2组和ZEN-Se3组子宫组织中ERαm RNA表达量均显著低于ZEN组（P＜0.05）;ZEN-Se3组子宫组织ERβm RNA表达量极显著高于ZEN组（P＜0.01）。结果表明:高浓度（0.6 mg/kg）的壳聚糖硒可提高饲喂ZEN日粮小鼠肝脏IFN-γ和IL-2 m RNA的表达量;不同浓度的壳聚糖硒对饲喂ZEN日粮小鼠肝脏CYP3A11 m RNA的表达量表现出提高的作用趋势（0.2mg/kg）或效果（0.4 mg/kg和0.6 mg/kg）;不同浓度的壳聚糖硒对饲喂ZEN日粮小鼠肝脏3α-HSD、3β-HSD m RNA的表达量表现出降低的作用趋势（0.2 mg/kg和0.4 mg/kg）或效果（0.6 mg/kg）;不同浓度的壳聚糖硒对饲喂ZEN日粮小鼠子宫ERαm RNA表达量表现出降低的作用趋势（0.2 mg/kg）或效果（0.4 mg/kg和0.6 mg/kg）,对子宫ERβm RNA表达量表现出提高的作用趋势（0.2 mg/kg和0.4 mg/kg）或效果（0.6 mg/kg）。