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目的:在胰腺导管腺癌(Pancreatic Ductal Adenocarcinoma,PDAC)中筛选神经侵袭(perineural invasion,PNI)相关差异性表达蛋白;利用胰腺导管腺癌表达谱芯片进一步筛选并分析神经侵袭胰腺癌中生物学过程的改变;确定神经侵袭胰腺癌中浸润的改变;初步探索乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)影响神经侵袭胰腺癌CD8+T细胞募集的过程及其机制。方法:运用公共数据库分析不同神经侵袭能力胰腺癌细胞的基因表达,筛选差异性表达的基因,并选择差异性表达蛋白CD74作为研究目标。利用仁济医院样本库验证并探讨了CD74及其下游胶质细胞源性神经营养因子GDNF(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)在胰腺癌神经侵袭中相互联系及调控作用。利用表达谱芯片分析50例PDAC患者中神经侵袭与非神经侵袭分组的肿瘤组织间差异性富集的生物学过程,并找到了发生神经侵袭组中免疫反应及免疫细胞趋化相关通路显著下调。通过免疫组化验证明确了神经侵袭胰腺癌中CD8+T细胞浸润情况。最后利用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)、蛋白芯片、细胞趋化实验、RNA原位杂交等一系列实验技术探讨副交感神经所分泌的神经递质乙酰胆碱通过调控CCL5表达影响CD8+T细胞趋化能力。结果:利用公共数据库GEO(Gene Expression Omibus)中关于胰腺癌细胞株的数据筛查与神经侵袭相关的差异基因,通过实验验证,我们发现CD74的表达在高神经侵袭组明显高于低神经侵袭组。在仁济大样本组织芯片中我们验证了CD74在胰腺癌组织中存在明显的阳性表达,并发现其与患者的神经侵袭(PNI)发生率显著相关(p=0.021)。我们在胰腺癌细胞系PANC-1中敲低CD74的表达时发现下游GDNF的表达明显降低;而当使用CD74外源性激动剂巨噬细胞移动抑制因子MIF(macrophage migration inhibition factor,MIF)刺激后发现GDNF明显上调,随后我们又通过组织芯片同样验证了发生神经侵袭胰腺癌中GDNF表达增多。利用表达谱芯片分析了50例PDAC患者不同神经侵袭分组中的差异性富集信号通路,不仅证实了发生神经侵袭胰腺癌中神经发育、轴突导向等通路有上调趋势,也发现免疫反应以及免疫细胞趋化相关通路显著下调。通过免疫组化发现神经侵袭胰腺癌中CD8+T细胞浸润明显降低。高效液相色谱(HPLC)检测结果提示神经侵袭胰腺癌组织中副交感神经递质乙酰胆碱(Ach)的浓度明显升高,随后通过细胞趋化实验可以得出乙酰胆碱能够明显降低肿瘤细胞募集CD8+T细胞的能力而N型受体抑制剂美卡拉明(mecamylamine,MEC)对抑制效果有所回救。蛋白芯片杂交实验结果显示N型受体激动剂尼古丁处理的细胞培养上清中趋化因子CCL5的浓度显著降低,并且RNA原位杂交实验验证了肿瘤微环境中CCL5的来源为胰腺癌细胞。最终我们可以得出结论副交感神经所分泌的神经递质乙酰胆碱能通过调控趋化因子CCL5的表达影响CD8+T细胞趋化能力。结论:神经侵袭是胰腺癌最具有特征性的生物学行为之一,神经与肿瘤之间存在着复杂且重要的相互作用,肿瘤细胞促进了神经重塑及神经侵袭的发生,而神经所分泌的神经递质、营养因子以及趋化因子也有助于肿瘤细胞的生长和侵袭转移。肿瘤特异性表达的膜蛋白CD74通过下游GDNF介导可能有助于胰腺癌神经侵袭的发生。神经侵袭胰腺癌中副交感神经递质乙酰胆碱浓度显著上调并且能够通过N型受体有效降低肿瘤细胞募集CD8+T细胞的趋化功能从而导致了神经侵袭胰腺癌中免疫反应受到了抑制。趋化因子CCL5对CD8+T细胞有明显的趋化招募作用,而神经侵袭胰腺癌中异常分泌的乙酰胆碱正是通过降低趋化因子CCL5的表达进而下调了肿瘤细胞对于CD8+T细胞的募集作用。