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目的基因治疗是当前肿瘤生物治疗的研究热点,也是以后肿瘤治疗的发展趋势,放疗是目前肿瘤治疗的主要方法,放疗和基因治疗两者之间存在着相互增强的作用。增强的机理是射线照射后增加基因转染的效率和（或）促进基因的表达,另外基因转染后可增加肿瘤细胞对射线照射的敏感性。人Rb基因（视网膜母细胞瘤基因）是最早克隆出来的人类肿瘤抑制基因,Rb94基因是Rb基因的一部分,野生型pRb110蛋白N端缺失112个氨基酸残基即为pRb94蛋白。有研究表明Rb94基因有比Rb基因更好的抑瘤效应。本实验目的是通过含有Rb94基因的重组腺病毒载体（Ad-Rb94）转染体外培养的人肝癌细胞系HepG2及人宫颈癌细胞系Hela,观察Rb94基因的抑瘤效应,然后联合X射线照射,研究两者的协同抑瘤作用,为临床恶性肿瘤的基因治疗和放射治疗的联合应用提供实验依据。方法构建好的含有Rb94基因的腺病毒表达载体,经PacI进行酶切后,在脂质体的作用下转染293A细胞进行扩增,制备大量的腺病毒颗粒。用PCR法鉴定重组Ad-Rb94载体中Rb94基因的存在,测定病毒颗粒滴度。选择肝癌和宫颈癌两株细胞进行实验,实验分组设计为空白对照组、Ad-lacZ对照组、Ad-Rb94组、放疗组和Ad-Rb94联合放疗组。用MTT法和流式细胞术观察Rb94基因联合放疗对细胞生长及细胞周期、凋亡的影响。结果1.构建的重组腺病毒表达载体经PCR鉴定含有Rb94目的基因;2.腺病毒滴度较高,为1.6×108pfu/ml,达到体外和体内实验的要求;3.空白对照组与Ad-lacZ组比较差异无统计学意义（p＞0.05）;4.肝癌HepG2细胞生长曲线:Ad-Rb94基因组、放疗组和Ad-Rb94基因联合放疗组HepG2细胞的生长均受到抑制,尤其在转染后96h细胞存活数量最低,与Ad-lacZ组和空白对照组比较差异均有显著性（P＜0.05）。联合治疗组HepG2细胞生长最慢,Ad-Rb94与放疗联合应用后96h,对HepG2细胞生长的抑制率达55.63%±8.97%,显著高于单用Ad-Rb94组（31.61%±3.25%,p＜0.05）和放疗组（20.06%±4.33%,p＜0.05）;5.宫颈癌Hela细胞生长曲线:Ad-Rb94基因组、放疗组和Ad-Rb94基因联合放疗组Hela细胞的生长均受到抑制,尤其在转染后96h细胞存活数量最低,与Ad-lacZ组和空白对照组比较差异均有显著性（P＜0.05）。联合治疗组Heta细胞生长最慢,Ad-Rb94与放疗联合应用后96h,对Hela细胞生长的抑制率达51.84%±3.84%,显著高于单用Ad-Rb94组（37.40%±5.65%,p＜0.05）和放疗组（35.42%±2.47%,p＜0.05）;6.肝癌HepG2细胞周期和凋亡情况:流式细胞术检测结果显示,Ad-Rb94组、放疗组及Ad-Rb94联合放疗组HepG2停留在G2/M期的细胞增加,G0/G1期和S期细胞数量减少,凋亡细胞数量增加。Ad-Rb94联合放疗组HepG2细胞凋亡率27.1%,显著高于单用Ad-Rb94组（18.2%）和放疗组（11-3%）:结论1.所构建的重组腺病毒表达载体Ad-Rb94扩增后,建立了可获得高滴度含Rb94基因腺病毒（Ad-Rb94）库,经PCR验证含有Rb94目的基因,表明扩增成功;2.重组腺病毒Ad-Rb94能抑制肝癌细胞和宫颈癌细胞的生长,通过与Ad-lacZ对照比较,表明对肿瘤细胞的抑制作用来自转导的Rb94基因,而不是腺病毒载体本身;3.Ad-Rb94组、放疗组及Ad-Rb94联合放疗组对HepG2和Hela细胞的生长抑制作用呈时间依赖性,联合治疗组具有协同作用;Ad-Rb94组、放疗组及Ad-Rb94联合放疗组阻滞肝癌HepG2细胞周期于G2/M期,促进细胞凋亡,联合治疗组具有协同作用,为今后用于临床恶性肿瘤的治疗提供了一个新的治疗方案。