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背景: 结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,是全世界癌症死亡的主要原因。近年来,随着我国人民生活水平的提高和饮食结构的改变,结肠癌的发病率和病死率正在逐年上升。结肠癌已居我国恶性肿瘤死因的第5位,仅次于肺癌、胃癌、肝癌和食管癌。结肠癌的发生发展是一个多因素、多阶段共同参与的复杂的生物学过程,目前由于对结肠癌分子生物学发病机制尚不完全明了,对它早期发现和预后判断也不够完善,因此积极探索结肠癌形成的分子机制,研究预测其生物学行为的标志物对结肠癌的早期诊断、治疗及预后判断具有重要意义。 目的: 通过检测正常结肠组织、结肠癌癌旁组织和结肠癌组织中同源异形盒基因HOXA9和细胞核相关抗原Ki-67的mRNA及蛋白表达情况,探讨同源异形盒基因HOXA9和细胞核相关抗原Ki-67在结肠癌组织中的表达及临床意义,为结肠癌的临床治疗和预后判断寻找新的肿瘤标志物。 方法: 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测同源异形盒基因HOXA9及细胞核相关抗原Ki-67在60例结肠癌组织、癌旁组织和正常结肠组织中的mRNA表达水平。采用蛋白印记法(Western blot)检测HOXA9在结肠癌组织和正常结肠组织中的蛋白表达水平。采用免疫组化方法(Immunohistochemistry)进一步检测HOXA9及Ki-67在60例结肠癌组织、癌旁组织和正常结肠组织中的蛋白表达,并明确其在结肠癌细胞中的表达定位,分析HOXA9与患者性别、发病年龄、肿瘤直径大小、肿瘤分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移之间的关系。以上方法检测HOXA9及Ki-67在60例结肠癌组织、癌旁组织和正常结肠组织之间的表达差异,运用SPSS17.0软件进行统计学分析。 结果: 1、同源异形盒基因HOXA9阳性为细胞质或/及细胞膜中出现黄色或棕黄色颗粒表达反应物,在结肠癌组织中HOXA9表达阳性率为74%(44/60),而在正常结肠组织和结肠癌癌旁组织中表达阳性率为20%(12/60)和26.7%(16/60),结肠癌组织中HOXA9表达明显高于正常结肠组织,有显著性差异(P<0.05)。同源异形盒基因HOXA9mRNA的相对表达含量为(0.638±0.045),明显高于正常结肠组织(0.154±0.033)和癌旁组织(0.256±0.038),HOXA9mRNA在结肠癌组织中的表达含量为正常结肠组织的4.14倍,差异有显著性(P<0.05)。 2、Western blot证实,HOXA9蛋白表达水平在结肠癌组织中表达显著高于配对正常组织,与PCR及免疫组化结果一致。 3、细胞核相关抗原Ki-67阳性为细胞核中出现棕黄色颗粒表达反应物,在结肠癌组织中细胞核相关抗原Ki-67表达阳性率为80%(48/60),而在正常结肠组织和结肠癌癌旁组织中表达阳性率为16.7%(10/60)和20%(12/60),结肠癌组织中Ki-67表达亦明显高于正常结肠组织,有显著性差异(P<0.05)。细胞核相关抗原Ki-67mRNA在正常结肠组织、结肠癌癌旁组织和结肠癌组织中均有不同程度的表达,相对表达量分别为0.164±0.025、0222±0.045、0.585±0.039,Ki-67mRNA在结肠癌组织中的表达含量为正常结肠组织的3.57倍,差异有统计学意义(P<0.05)。 4、在结肠癌患者中,同源异形盒基因HOXA9表达与患者的发病年龄、性别、肿瘤直径无明显相关性(P均大于0.05),而与肿瘤细胞分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移显著相关(P<0.05)。TNM分期越晚、淋巴结转移越早、肿瘤分化程度越差,HOXA9表达量越高。 5、在结肠癌患者中,细胞核相关抗原Ki-67表达亦与结肠癌的肿瘤细胞分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移显著相关(P<0.05),与患者发病年龄、性别、肿瘤直径大小亦无明显相关性(P>0.05)。 6、在结肠癌组织中,同源异形盒基因HOXA9表达阳性组Ki-67阳性表达为90.9%,明显高于同源异形盒基因HOXA9阴性组的表达50%,Pearson卡方值为12.27,P值小于0.001,可认为二者表达有联系;Kappa值为0.44,介于0.4至0.75之间,显示同源异形盒基因HOXA9与细胞核相关抗原Ki-67的表达在结肠癌中表达具有一致性,一致性程度为中度一致,表达结果一致性较为满意。 结论: 1、HOXA9在正常结肠组织、结肠癌癌旁组织及结肠癌组织中的表达呈逐渐增高的趋势,提示同源异形盒基因HOXA9与结肠癌的发生有着密切关系,HOXA9基因的表达上调能够促进正常结肠细胞向肿瘤细胞分化,在结肠癌发生发展的过程中可能扮演着重要角色。 2、HOXA9的表达强度与结肠癌的肿瘤分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移显著相关,TNM分期越晚、淋巴结转移越早、肿瘤分化程度越差,HOXA9表达量就越高,提示同源盒基因HOXA9在促进结肠癌细胞增值、浸润及转移过程中起着重要作用。HOXA9高表达可能成为判断结肠癌恶性程度高,患者预后差的信号之一。 3、HOXA9与Ki-67在结肠癌中的表达具有一致性,提示HOXA9可能有促进肿瘤增值的作用,两者可能共同参与结肠癌的发生、发展与转移过程。通过联合对同源异形盒基因HOXA9与细胞核相关抗原Ki-67在结肠癌组织中的检测,能更好地反映结肠癌肿瘤细胞增殖活性、侵袭能力、淋巴转移和恶性程度,对结肠癌的早期发现及其预后判断有着重要的临床指导意义。