【摘 要】
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背景与目的:作为女性中最常见的肿瘤之一,宫颈癌（Cervical Cancer,CC）一直具有较高死亡率,其发生发展是一个连续的病变过程,从宫颈鳞状上皮发生非典型增生到发展为浸润癌往往需要数10年的时间,因此,探索宫颈癌发生和发展的分子机制,找到新的生物标志物,早发现、早治疗是提高宫颈癌患者预后效果和生存率的最有效方法。本研究旨在探讨lncRNA H1FX-AS1及miR-324-3p在癌症组织中
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背景与目的:作为女性中最常见的肿瘤之一,宫颈癌（Cervical Cancer,CC）一直具有较高死亡率,其发生发展是一个连续的病变过程,从宫颈鳞状上皮发生非典型增生到发展为浸润癌往往需要数10年的时间,因此,探索宫颈癌发生和发展的分子机制,找到新的生物标志物,早发现、早治疗是提高宫颈癌患者预后效果和生存率的最有效方法。本研究旨在探讨lncRNA H1FX-AS1及miR-324-3p在癌症组织中表达水平对于宫颈癌的调控作用。方法:通过TCGA数据库及GEPIA网页对已有宫颈癌样本中lncRNA H1FX-AS1的表达及预后进行分析;然后收集宫颈癌患者50例标本,通过荧光PCR检测肿瘤组织和细胞中lncRNA H1FX-AS1及miR-324-3p的表达情况,通过卡方检验分析lncRNA H1FX-AS1及miR-324-3p表达对于宫颈癌细胞相关临床参数的影响。结果:lncRNA H1FX-AS1在宫颈癌样本组织中低表达,并且此类患者肿瘤较大、恶性程度较高、淋巴结转移较多、生存率较低;miR-324-3p基因在宫颈癌组织中高表达,而且表达水平和癌组织样本中的lncRNA H1FX-AS1表现出显著负相关关系。结论:lncRNA H1FX-AS1可能是宫颈癌发生发展的一个抑制因子,其低表达预测预后不良的预后,且其发挥作用的分子机制可能是通过靶向调节miR-324-3p基因的表达。背景与目的:随着医学技术的不断发展,以及医学界对恶性肿瘤研究的日渐深入,长链非编码RNA（lncRNAs）已经成为抗癌的研究热点,尽管这类不编码蛋白,但也参与了细胞周期、增殖、分化、凋亡等多种调控过程。本实验以2株宫颈癌细胞系（SiHa和Hela）为模型,探索lncRNAH1FX-AS1对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响。方法:本实验通过基因过表达技术观察细胞生物学功能的改变,利用CCK8实验对细胞的增殖情况加以验证,借助Transwell实验以及划痕实验,对细胞迁移、侵袭情况加以检验;在细胞凋亡方面,则采用目前已经较为成熟的流式细胞术检测;小鼠实验检测肿体内肿瘤的体积和大小。结果:lncRNA H1FX-AS1慢病毒载体能够增加该基因在SiHa和Hela细胞的表达;而lncRNA H1FX-AS1过表达,可对SiHa和Hela细胞的生长和增殖产生显著抑制作用,同时有助于细胞凋亡;过表达lncRNAH1FX-AS1基因显著降低小鼠体内瘤体的形成。结论:lncRNA H1FX-AS1通过抑制细胞增殖、迁移、侵袭并促进凋亡影响宫颈癌的发生和发展背景与目的:ceRNA假说主要是指,作为一种ceRNA,lncRNA假基因转录物或者mRNA转录物或能够利用miRNA反应元件而竞争性结合于具有相同MRE的miRNA,从而有效下调下游基因表达水平,实现对细胞功能的干扰和影响。有研究成果证明,lncRNA可作为一种ceRNA与miRNA之间相互作用,并且与其它基因表达的mRNA竞争相同的miRNA,从而在细胞中发挥信息交流和调控生物学功能的作用。本实验以lncRNA H1FX-AS1为研究对象,并且深入探讨其作为ceRNA调节宫颈癌细胞生物学功能的分子机制。方法:生物信息学网站预测的miR-324-3p的结合靶点和潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告实验、RNA免疫共沉淀实验、基因过表达或敲减实验证明lncRNA H1FX-AS1与该miRNA的直接相互作用及miR-324-3p与DACT1的相互作用。Western blot实验检测蛋白的表达。挽救实验检测过表达或敲减不同基因时细胞表型的变换。结果:lncRNA H1FX-AS1通过和miR-324-3p的靶向结合,下调miR-324-3p的mRNA在癌症组织中的表达水平;miR-324-3p可以靶向结合DACT1,在转录水平和翻译水平抑制DACT1的表达;lncRNA H1FX-AS1通过沉默miR-324-3p,进而上调DACT1在宫颈癌细胞中的表达,从而实现对癌症组织生长和增殖的限制作用。结论:lncRNAH1FX-AS1基因通过竞争性结合miRNA-324-3p,导致宫颈癌细胞中miRNA-324-3p靶基因DACT1的释放及蛋白水平的上调,从而抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭、迁移并促进宫颈癌细胞的凋亡。
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