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【研究背景】痤疮是一种具有高患病率的、发生于毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病,目前已经明确其发病与皮脂分泌增多以及皮脂成分改变、毛囊皮脂腺导管口角化过度、痤疮丙酸杆菌异常繁殖、相关炎症因子介导免疫炎症级联反应4大因素相关。角质形成细胞是毛囊皮脂腺单位中的主要组成细胞之一,在皮肤炎症反应中发挥重要作用,合成多种细胞因子参与痤疮皮损的免疫级联反应。痤疮丙酸杆菌是引发痤疮皮损炎症的重要因素。一方面,痤疮丙酸杆菌具有免疫刺激活性,可以诱导免疫细胞产生促炎细胞因子,参与免疫级联反应;另一方面,痤疮丙酸杆菌还可以刺激角质形成细胞增殖,促进毛囊漏斗部的过度角化。环状RNA（Circular RNA,circ RNA）是一类具有特殊稳定结构的非编码RNA。目前circ RNA被证实参与肿瘤、神经精神性疾病、代谢性疾病、血液疾病等的疾病的发生与发展;在皮肤疾病中,circ RNA也被证实参与皮肤鳞癌、黑色素瘤、基底细胞癌、银屑病、系统性红斑狼疮、皮肤创伤愈合等生理病理过程。近年研究表明,circ RNA可通过多种途径参与疾病发生与发展,在皮肤疾病中主要通过形成微小RNA（Micro RNA,mi RNA）海绵,竞争性结合mi RNA,解除其对下游靶m RNA的抑制作用,在转录或转录后水平调控靶基因的表达。我们课题组前期通过RNAseq高通量测序技术、生物信息学方法对三对痤疮皮损组织及周围非皮损组织进行研究,发现痤疮皮损与周边正常皮肤组织相比,有538个circ RNA具有表达差异,其中271个上调,267个下调。通过GO,KEGG富集分析发现这些异常表达的circ RNA主要涉及到上皮细胞增殖、免疫应答、脂质代谢等,而这些生物学过程和痤疮的发病密不可分。进一步验证发现在痤疮皮损中,circ0086376的表达显著下调,预测circ0086376可以通过与数个mi RNA例如mi R-145-5p、mi R-107、mi R-372-3p等相互结合形成海绵,参与调节相应目标基因的表达。因此我们设想,circ0086376作为mi RNA海绵,调节预目标基因的表达,影响角质形成细胞中炎症因子的分泌以及角质形成细胞的增殖,从而调控痤疮的免疫应答反应。目前,国内外尚未发现circ RNA在痤疮发病中作用的研究报道,因此,本课题的研究意义在于希望通过在分子转录水平上揭示痤疮的发病机制,以指导临床医生更深入地认识痤疮的发病机制,同时为进一步研究开发分子靶向药物提供理论依据。【目的】基于前期实验预测的结果,在体外细胞实验学的基础上,进一步探讨在痤疮皮损中表达显著下调的circ0086376是否可以调节由痤疮丙酸杆菌诱导的角质细胞免疫应答以及细胞增殖反应,参与痤疮炎症反应以及毛囊导管开口角化过度,从而初步探讨circ RNA参与痤疮发病的作用机制。【方法】通过人永生化表皮细胞株（Ha Ca T细胞）与不同含量的痤疮丙酸杆菌（OD595为1）共培养,分别利用QPCR以及ELISA实验观察痤疮丙酸杆菌对Ha Ca T细胞中circ0086376表达以及炎症因子IL-1β,IL-6,IL-12,IL-18,TNF-α分泌的影响。构建circ0086376过表达质粒以及干扰质粒,通过转染使Ha Ca T细胞过表达或敲降circ0086376,并用QPCR检测过表达与干扰的效果。筛选过表达以及干扰circ0086376的稳定株,加入相同含量痤疮丙酸杆菌共培养后,ELISA检测IL-1β,IL-6,IL-12,IL-18,TNF-α表达变化,CCK-8实验检测Ha Ca T细胞增殖情况。【结果】1.痤疮丙酸杆菌（OD595为1）可以抑制Ha Ca T细胞中circ0086376的表达;当痤疮丙酸杆菌以6μl、8μl、10μl与Ha Ca T共培养时,circ0086376的表达显著下调（P<0.01）。2.Ha Ca T细胞转染circ0086376过表达质粒后,circ0086376表达量明显增多（P<0.001）;Ha Ca T细胞转染circ0086376干扰质粒后,circ0086376表达量明显下降（P<0.01）。3.痤疮丙酸杆菌（OD595为1）作用后,Ha Ca T细胞中IL-1β,IL-6,IL-12,IL-18,TNF-α的分泌均增多;当痤疮丙酸杆菌以6μl、8μl、10μl与Ha Ca T共培养时,上述炎症因子的表达显著增多（P<0.01）。4.过表达circ0086376后,降低了痤疮丙酸杆菌引起的IL-1β,IL-6,IL-12,IL-18,TNF-α的分泌量（P<0.05）;干扰circ0086376后,促进了痤疮丙酸杆菌引起的上述炎症因子的分泌量（P<0.05）。5.过表达circ0086376后,降低了痤疮丙酸杆菌引起的Ha Ca T细胞增殖（P<0.01）;干扰circ0086376后,促进了痤疮丙酸杆菌引起的Ha Ca T细胞增殖（P<0.01）。【结论】circ0086376通过调节由痤疮丙酸杆菌诱导的角质形成细胞炎症因子的分泌以及细胞增殖反应,从而参与痤疮皮损的免疫应答。