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目的: 1.研究化学合成的AMH-siRNA作用卵巢颗粒肿瘤细胞COV434后AMH基因表达的情况;探讨siRNA沉默AMH基因的效果; 2.研究AMH-siRNA对卵巢颗粒肿瘤细胞COV434中SCF基因表达的影响,探讨siRNA作用下AMH沉默对SCF表达的影响。 方法: 1.将化学合成的4个特异性Hs_AMHFlexiTube siRNA序列,一个Negative siRNA序列,用转染试剂HiperFectRTransfection Reagent瞬时转染COV434细胞。实验分组:空白对照组(未转染)、阴性对照组(Negative siRNA转染)、实验组(AMH-siRNA转染);通过荧光定量PCR(Q-PCR)检测空白对照组和siRNA转染24h后AMH mRNA表达,选择沉默效果最好的AMH-siRNA用于后续试验研究; 2.将筛选出的siRNA转染COV434细胞,分组同前,使用荧光定量PCR和免疫荧光化学技术检测转染24h后细胞中SCF mRNA及蛋白表达变化;免疫荧光化学技术检测细胞中AMH蛋白表达变化。 结果: 1.4个AMH-siRNA均能有效沉默COV434细胞中AMH mRNA的表达,以AMH-4-siRNA的沉默效果最为明显;与空白对照组及阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01); 2.免疫荧光检测结果显示AMH-4-siRNA转染24h后AMH蛋白表达水平降低,与空白对照组及阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01);.Q-PCR和免疫荧光检测结果显示AMH-4-siRNA转染24h后SCF mRNA及蛋白表达水平增高,与空白对照组及阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05); 3.Negative siRNA转染后AMH和SCF mRNA及蛋白的表达水平无明显变化,与空白对照组及阴性对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05); 结论 1.4条AMH-siRNA均能有效沉默COV434细胞中AMH的转录表达,并有一定差异性; 2.AMH-4-siRNA在下调细胞中AMH蛋白表达同时上调SCF mRNA及蛋白表达,AMH对SCF可能起负向调节作用。