【摘 要】
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【目的】探讨棕榈酸（Palmitic acid,PA）对内皮细胞铁死亡的影响,以及硫化氢对PA诱导的内皮细胞铁死亡的抑制作用。【方法】（1）将8周龄Apo E-/-小鼠高脂饮食喂养12周,同时腹腔注射或不注射Fer-1铁死亡抑制剂12周,采用油红O观察动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）病变面积,免疫荧光和免疫组化分别检测铁死亡相关蛋白GPX4和PTGS2的表达情况。（2）免疫荧光
【基金项目】
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国家自然科学基金（81770454）； 湖南省卫健委 2020 年重点指导课题（20201905）；
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【目的】探讨棕榈酸（Palmitic acid,PA）对内皮细胞铁死亡的影响,以及硫化氢对PA诱导的内皮细胞铁死亡的抑制作用。【方法】（1）将8周龄Apo E-/-小鼠高脂饮食喂养12周,同时腹腔注射或不注射Fer-1铁死亡抑制剂12周,采用油红O观察动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）病变面积,免疫荧光和免疫组化分别检测铁死亡相关蛋白GPX4和PTGS2的表达情况。（2）免疫荧光和免疫组化观察人AS斑块中GPX4和PTGS2的表达情况。（3）通过CD31对人AS斑块中内皮细胞进行定位,免疫荧光观察人AS斑块中内皮细胞GPX4表达情况,免疫组化观察人AS斑块中内皮细胞PTGS2表达情况。（4）不同浓度棕榈酸（0、200、400、600、800、1000μM）处理HUVECs 24h后,采用荧光显微镜观察细胞中ROS生成情况,运用q RT-PCR和Western blot分别检测HUVECs中GPX4和PTGS2的表达水平,运用Western blot分别检测HUVECs中ICAM-1和IL-6蛋白表达水平。（5）铁死亡诱导剂Erastin和不同浓度的Na HS（0、50、100、200μM）共处理HUVECs 24h后,检测细胞内ROS生成情况,MDA和GSH水平,运用q RT-PCR和Western blot分别检测HUVECs中GPX4和PTGS2的表达水平,运用Western blot检测HUVECs中ICAM-1蛋白表达水平。（6）400μM PA和200μM Na HS或10μM Fer-1共处理HUVECs 24h后,检测细胞内ROS生成情况,MDA和GSH水平,运用Western blot分别检测HUVECs中GPX4和PTGS2的表达水平,运用Western blot分别检测HUVECs中ICAM-1和IL-6蛋白表达水平。【结果】（1）油红O结果显示与Apo E-/-小鼠相比,注射铁死亡抑制剂Fer-1小鼠的病变面积减轻;免疫荧光结果显示与Apo E-/-小鼠相比,Fer-1组小鼠的GPX4的表达上调;免疫组化结果显示,Fer-1组小鼠PTGS2的表达下调。（2）免疫荧光结果显示,与正常组织相比,人AS斑块中GPX4的表达下调;免疫组化结果显示,人AS斑块中PTGS2的表达上调。（3）免疫荧光结果显示人AS内皮细胞中GPX4的表达下调,免疫组化结果显示人AS内皮细胞中PTGS2的表达上调。（4）与对照组相比,PA处理组ROS水平增加;Western blot及q RT-PCR结果显示,与对照组相比,GPX4蛋白和m RNA的表达随着PA浓度的升高逐渐减少,同时PTGS2的表达随着PA浓度的升高逐渐增加;Western blot结果显示PA处理可上调ICAM-1和IL-6的表达。（5）与Erastin组相比,Na HS处理组细胞内ROS和MDA的水平减少,GSH水平增加;Western blot及q RT-PCR结果显示,与Erastin组相比,GPX4的表达随着Na HS浓度的升高逐渐增加,同时PTGS2的表达逐渐减少;Western blot结果显示,与Erastin组相比,Na HS处理可下调ICAM-1的表达。（6）与PA组相比,Na HS与PA共处理组ROS和MDA的水平减少,GSH的水平增加,Western blot结果显示,与PA处理组相比,Na HS与PA共处理可以明显上调GPX4的表达,下调PTGS2的表达;Western blot结果显示与PA组相比,Na HS与PA共处理可下调ICAM-1和IL-6的表达。【结论】（1）人AS斑块存在铁死亡发生,抑制铁死亡可以减轻小鼠AS病变程度;（2）PA可诱导HUVECs铁死亡;（3）H2S可抑制PA诱导的HUVECs铁死亡,减轻HUVECs功能障碍。
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