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目的:我们在前期研究中发现一个G蛋白偶联受体激酶4（G Protein-Coupled Receptor Kinase 4,GRK4）介导的与人鼻咽癌CNE2细胞增殖相关的竞争性内源RNA（competing endogenous RNAs,ce RNA）网络,包括7个长链非编码RNA（long noncoding RNA,lnc RNA）和周期蛋白依赖性激酶6（cyclin-dependent kinases 6,CDK6）。本研究旨在验证与筛选此ce RNA网络模型中的lnc RNAs分子;明确GRK4介导lnc RNA CTD-2270P14.5的表达调控;探究CTD-2270P14.5对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其调控机制。方法:1.生物信息学分析检测GRK4在人乳腺癌组织中的表达及其预后价值。2.采用p EGFP-GRK4质粒转染CNE2细胞,流式细胞仪分选GRK4（+）/（-）细胞。实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q PCR）验证GRK4及其介导的ce RNA网络模型中lnc RNAs分子的表达情况。3.收集6例新鲜临床乳腺癌及癌旁组织标本和培养的人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞,采用蛋白质印迹法（Western Blot）和q PCR检测GRK4及其介导的ce RNA网络中lnc RNAs的表达情况;SPSS统计学软件分析找出最具表达差异的关键lnc RNA。4.采用GRK4小干扰RNA（small interfering RNA,si RNA）转染GRK4高表达的乳腺癌MCF-7细胞,构建GRK4敲低细胞系（si-GRK4）和对照细胞系（NC）。采用p EGFP-GRK4质粒转染GRK4低表达的乳腺癌MDA-MB-231细胞,构建GRK4过表达试验组和对照组。Western Blot和q PCR验证转染后GRK4的表达,检测CTD-2270P14.5的表达水平。5.分别以CTD-2270P14.5的短发夹RNA（short hairpin RNA,sh RNA）转染乳腺癌MCF-7细胞株,CTD-2270P14.5表达质粒转染MDA-MB-231细胞株。q PCR验证转染后CTD-2270P14.5的表达情况,采用MTT比色法和克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力;采用Transwell实验检测乳腺癌细胞的侵袭能力;采用SA-β-gal染色检测乳腺癌细胞的衰老表型;采用流式细胞术（Flow Cyto Metry,FCM）检测细胞周期分布。6.采用q PCR和Western Blot检测CTD-2270P14.5过表达组、干扰组及对照组中CDK6的表达水平。结果:1.GEPIA（Gene Expression Profilling Interactive Analysis,GEPIA）数据库分析提示GRK4在乳腺癌组织中显著低表达（p＜0.05）,Kaplan-Meier数据库提示GRK4高表达的乳腺癌患者预后更好（p＜0.05）。2.GRK4介导的ce RNA网络模型中7个lnc RNAs在GRK4（+）-CNE2与GRK4（-）-CNE2细胞中均存在差异性表达,其中以CTD-2270P14.5的表达差异最为显著（p＜0.001）。3.GRK4在乳腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（p＜0.01）;GRK4在MCF-7细胞中的表达水平显著高于MDA-MB-231细胞（p＜0.01）。ce RNA网络模型中7个lnc RNAs在MCF-7、MDA-MB-231细胞株中存在差异性表达。CTD-2270P14.5在MCF-7细胞中的表达水平显著高于MDA-MB-231细胞（p＜0.001）。4.GRK4干扰效率约为70%（p＜0.001）。GRK4过表达试验组细胞中的GRK4表达水平约为对照组的3倍（p＜0.001）。GRK4干扰组（si-GRK4）MCF-7细胞中CTD-2270P14.5的表达水平显著降低（p＜0.001）;GRK4过表达组MDA-MB-231细胞中CTD-2270P14.5表达水平显著升高（p＜0.001）。5.MCF-7细胞中CTD-2270P14.5的敲低效率约为58%（p＜0.001）。CTD-2270P14.5在其过表达试验组细胞中的表达水平约为对照组的1.63倍（p＜0.001）。MTT实验及平板克隆形成实验结果显示:CTD-2270P14.5过表达组MDA-MB-231细胞的体外增殖能力明显降低,差异有统计学意义。细胞周期结果:过表达CTD-2270P14.5能够导致G1期细胞百分比升高,细胞周期阻滞。SA-β-gal染色实验提示:CTD-2270P14.5诱导MDA-MB-231细胞发生衰老表型样改变。Transwell侵袭实验结果表明:CTD-2270P14.5过表达可以减弱MDA-MB-231细胞的侵袭能力。6.CTD-2270P14.5干扰组细胞中CDK6的m RNA水平和蛋白质水平显著上调;CTD-2270P14.5过表达组细胞中CDK6的表达水平较对照组明显下降。差异具有统计学意义。结论:1.GRK4在人乳腺癌中差异表达,GRK4正向调控lnc RNA CTD-2270P14.5的表达。2.CTD-2270P14.5抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭,诱导乳腺癌细胞发生衰老表型样改变。3.GRK4可能通过CTD-2270P14.5-CDK6信号通路调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。