重组蛋白MnSOD-LCA2在缓解动物氧化损伤中的作用研究

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氧化应激会使动物机体处于亚健康状态,导致相应功能损伤,生产、繁殖性能下降。因此,如何缓解或防止动物氧化应激是提高养殖效益的关键。为此,本试验构建了锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的原核表达载体,并表达和纯化了成熟的MnSOD-LCA2蛋白,研究了该蛋白对A431、A549细胞及小鼠氧化损伤的缓解作用,为重组蛋白MnSOD-LCA2在缓解畜禽氧化损伤中的应用提供理论依据及技术支撑。为探究MnSOD-LCA2对H2O2致A431、A549细胞损伤的修复作用,将细胞分为对照组、H2O2预处理组和试验组(在H2O2预处理组中分别添加50,100,200,400μg/m L MnSOD-LCA2)。检测各组细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)及蛋白质羰基(PCG)等抗氧化指标的浓度。结果发现,试验组A431、A549细胞中MDA、PCG含量显著降低(P<0.05),GSH-Px、T-SOD及CAT活性显著增强(P<0.05)。表明MnSOD-LCA2提高了A431、A549细胞内的抗氧化性能。为探究MnSOD-LCA2溶液对小鼠皮肤及肺组织氧化损伤的安全性及有效性,将900U/cm~2MnSOD-LCA2溶液喷洒于健康小鼠以测试其安全性,结果未发现小鼠死亡,皮肤和肺部均未出现致敏表现,生命体征平稳,说明MnSOD-LCA2溶液具有一定的安全性。其次,将50只小鼠随机分为对照组(N组)、H2O2组(M组)、低剂量试验组(LD组,300 U/cm~2MnSOD-LCA2)、中剂量试验组(MD组,600 U/cm~2MnSOD-LCA2)、高剂量试验组(HD组,900 U/cm~2MnSOD-LCA2),观察小鼠生理体征变化,检测血清、皮肤及肺组织中相关抗氧化指标浓度。结果显示,在H2O2的作用下,M组小鼠皮肤与肺均出现氧化损伤。在MnSOD-LCA2治疗下,小鼠精神好转,饮食与活动明显增加;血清、皮肤、肺部SOD、CAT、GSH-Px活性显著提高(P<0.05),MDA、PCG、和8-Ohd G的浓度显著降低(P<0.05);与H2O2组相比,600 U/cm~2MnSOD-LCA2组小鼠皮肤组织表皮层结构完整,鳞状上皮细胞形态结构正常、排列紧密,肺部组织中炎症症状减轻。综上,重组蛋白MnSOD-LCA2具有较好的安全性,可缓解小鼠皮肤及肺组织氧化损伤,浓度为600 U/cm~2时效果最佳。
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