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绿原酸(Chlorogenic acid,CGA)作为一种植物提取物,具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗肿瘤和免疫调节等多种生物活性。通过胚蛋给养(In ovo feeding)技术,在胚期注射具有特定功能的物质可以改善家禽的健康和生产状况。本研究通过在鸡胚羊膜腔注射绿原酸,研究绿原酸对肉鸡生产和肠道健康的影响,旨在为肉鸡的绿色健康养殖提供技术支持,研究结果能为胚蛋给养的表观遗传调控机制提供初步的理论依据。试验一:胚蛋给养绿原酸对雏鸡抗氧化性能的影响。选取优质的14胚龄哈伯德利丰肉鸡种蛋100枚,随机分为5个处理组,每组20个重复(20枚蛋),于17胚龄进行羊膜腔注射,除NC组外等剂量注射0.5 m L。各处理组分别为:负对照组(NC):不做任何处理;正对照组(PC):注射生理盐水;4CGA组:注射4 mg绿原酸;7CGA组:注射7 mg绿原酸;10CGA组:注射10 mg绿原酸。结果显示,各组的孵化率均为100%;与PC组相比,4CGA组的血清丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量有降低的趋势(P=0.0691),CGA处理组的血清超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力水平显著升高(P<0.05);在肝脏和肠道组织中,CGA处理组的抗氧化相关基因(Nrf2、HO-1、GSS、GPX7)m RNA表达均有所升高(P<0.05)。结果表明,胚蛋注射绿原酸能提高雏鸡抗氧化酶的活力及基因表达,提高雏鸡的抗氧化能力。试验二:胚蛋给养绿原酸对热应激肉鸡抗氧化性能的影响。选取优质的14胚龄爱拔益佳肉鸡种蛋300枚,随机分为5个处理组,每组6个重复,每个重复10枚,于17胚龄进行羊膜腔注射,除NC组外等剂量注射0.5 m L。各处理组分别为:负对照组(NC):不做任何处理;正对照组(PC):注射生理盐水;4CGA组:注射4 mg绿原酸;7CGA组:注射7 mg绿原酸;10CGA组:注射10 mg绿原酸。雏鸡出壳后,在每个重复中挑选6只健康且体重均匀的雏鸡进行饲养。在28~42日龄进行热应激处理(35±1°C,8 h/d)。结果显示,各组的孵化率没有显著差异(P>0.05);各组全期的生产性能无显著差异(P>0.05);在35日龄时,4CGA组的血浆MDA含量显著低于NC组和其它绿原酸处理组(P<0.05)。与NC组相比,4CGA组的血浆SOD酶活显著升高(P<0.05),7CGA组的血浆谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量显著高于PC组和其它绿原酸处理组(P<0.05);在42日龄时,与NC组相比,4CGA组的血浆MDA含量显著降低(P<0.05),4CGA组的血浆SOD酶活、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)酶活和过氧化氢酶(Catalase,CAT)酶活显著升高(P<0.05);在35日龄时,与NC组相比,在十二指肠中,4CGA组的绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高(P<0.05)。在空肠中,4CGA组的绒毛高度显著提高(P<0.05),隐窝深度显著降低(P<0.05),绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高(P<0.05);在42日龄时,与NC组相比,在十二指肠中4CGA组的绒毛高度显著升高(P<0.05),在空肠中4CGA组的绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高(P<0.05);42日龄抗氧化基因检测结果显示,在十二指肠中,与NC组和PC组相比,4CGA组核转录相关因子-2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶-1(Heme oxygenase 1,HO-1)、谷胱甘肽合成酶(Glutathione synthetase,GSS)、超氧化物歧化酶1(Superoxide dismutase 1,SOD1)m RNA表达显著升高(P<0.05),超氧化物歧化酶2(Superoxide dismutase 2,SOD2)m RNA表达有升高的趋势(P=0.0933)。与PC组相比,绿原酸处理组谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase,GSR)、谷胱甘肽过氧化物酶7(Glutathione peroxidase 7,GPX7)m RNA表达显著升高(P<0.05)。4CGA组CAT m RNA表达显著高于NC组(P<0.05);42日龄DNA甲基化相关酶的基因检测结果显示,在十二指肠中,与NC组和PC组相比,4CGA组甲基胞嘧啶双加氧酶1(Ten eleven translocation 1,Tet1)、甲基胞嘧啶双加氧酶2(Ten eleven translocation 2,Tet2)、DNA甲基转移酶3A(DNA-methyltransferase 3alpha,DNMT3A)m RNA表达显著升高(P<0.05)。与NC组相比,4CGA组DNA甲基转移酶1(DNA-methyltransferase 1,DNMT1)m RNA表达有升高的趋势(P=0.0557);42日龄热休克蛋白基因检测结果显示,在十二指肠中,与NC组和PC组相比,4CGA组和7CGA组热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)m RNA表达显著升高(P<0.05)。在空肠中,与NC组相比,4CGA组热休克蛋白60(Heat shock protein 60,HSP60)和HSP70 m RNA表达显著降低(P<0.05)。结果表明,胚期注射绿原酸能缓解热应激引起的肉鸡肠道组织氧化损伤,提高抗氧化酶的活力,促进十二指肠中抗氧化基因的表达,其中4CGA组的效果最好。十二指肠中DNA甲基化相关酶的m RNA表达增加,表明绿原酸对热应激肉鸡的抗氧化作用可能与表观遗传相关。试验三:胚蛋给养绿原酸对热应激肉鸡肠道微生物的影响。选取优质的14胚龄爱拔益佳肉鸡种蛋180枚,随机分为3个处理组,每组6个重复,每个重复10枚,于17胚龄进行羊膜腔注射,除NC组外等剂量注射0.5 m L。各处理组分别为:负对照组(NC):不做任何处理;正对照组(PC):注射生理盐水;CGA组:注射4 mg绿原酸。雏鸡出壳后,在每个重复中挑选6只健康且体重均匀的雏鸡进行饲养。在28~42日龄进行热应激处理(35±1°C,8 h/d)。42日龄盲肠微生物结果显示,在门水平上,NC组厚壁菌门(Firmicutes)的丰度约为40%,CGA组厚壁菌门的丰度约为53%,显著提高了32%(P<0.05),软壁菌门(Tenericutes)的丰度提高了68%(P>0.05),拟杆菌门(Bacteroidetes)的丰度降低了17%(P>0.05),疣微菌门(Verrucomicrobia)的丰度降低了54%(P>0.05);在属水平上,NC组乳杆菌属(Lactobacillus)的丰度约为7%,CGA组乳杆菌属的丰度约为15%,提高了114%(P>0.05),拟杆菌属(Bacteroides)的丰度提高了5%(P>0.05),艾克曼菌属(Akkermansia)的丰度降低了54%(P>0.05);与NC组和PC组相比,CGA组的chao1指数和observed_otus指数显著提高(P<0.05)。显著性差异分析结果显示,NC组的特征微生物是粪杆菌属(Faecalibacterium)、巴恩斯氏菌属(Barnesiella)、厌氧菌属(Anaerostipes)和脱铁杆菌属(Mucispirillum)。PC组的特征微生物是链球菌属(Streptococcus)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、根瘤菌目(Rhizobiales)、沙雷氏菌属(Serratia)和放线菌属(Actinomyces)。CGA组的特征微生物是真杆菌属(Eubacterium)、柯林斯菌属(Collinsella)和异味杆菌属(Odoribacter)。结果表明,胚蛋注射绿原酸可提高盲肠中厚壁菌门和乳杆菌属的相对丰度,提高菌群的物种丰富度,并通过增加有益菌的数量和减少有害菌属来调节肠道菌群。综上所述,胚蛋注射绿原酸有利于肠道的发育,能缓解热应激引起的肝脏和肠道组织氧化损伤,促进肠道尤其是十二指肠的抗氧化能力,其中4CGA组的效果最好。绿原酸对热应激肉鸡的抗氧化作用可能与表观遗传相关。同时,胚蛋注射绿原酸可提高盲肠中厚壁菌门和乳杆菌属的相对丰度,提高菌群的物种丰富度,并通过增加有益菌的数量和减少有害菌属来调节肠道菌群。