第一部分文献研究现今,糖尿病(DM)发病率呈逐年增长趋势,为全球带来了一个警号,严重威胁着人类的健康。随着医疗提升人类寿命的延长及富裕的生活方式的普及,糖尿病患病率近10年来以翻倍的形式增加,估计未来20年全球将近有6亿名糖尿病患者。而目前为止,对于2型糖尿病(T2DM)发病机制尚未完全剖析清楚,其重要的发病机制主要围绕胰岛素抵抗方面,又以在受体后胰岛素产生多个信号转导通路异常为多见。因此,重点解决2型糖尿病发生的胰岛素信号转导通路的异常,改善胰岛素抵抗,在治疗2型糖尿病发展历史上寻找新的出路是治疗的关键。越来越多研究表明中医药站在防治2型糖尿病及其并发症上,有明显独特的优势。中医对消渴病的记载由来已久,有消痹、膈消、消中等等,历代有名的医家和后世学者均对消渴病研究积累了相当丰富的诊疗经验,进行了大量的实验研究,并充分取得了研究成果。降糖三黄片是我校有名老中医熊曼琪教授根据《伤寒论》的经验总结,并运用、研究已有二十余年,在我院临床广泛应用,对气阴两虚、热瘀互结的糖尿病具有确切的疗效。本文通过实验研究来观察降糖三黄片对糖尿病从宏观到微观的整体性理论,进一步证明其作用机理及治疗作用。第二部分实验研究目的：利用STZ糖尿病模型大鼠观察造模过程的气血阴阳证型分析,以及降糖三黄片对糖尿病大鼠血清GLP-1、FFA的影响,大肠、胰脏的GLP-1及PDX-1的蛋白表达的影响,以及糖尿病大鼠胰脏组织超微结构形态学的改变,进而阐述降糖三黄片治疗气阴两虚型糖尿病的机理,为其增强胰岛功能提供新的证明。方法：将82只雄性SPF级SD大鼠普通饲料喂养5天,适应性喂养后,再随机分为2组,正常组10只,续按普遍词料喂养；余下大鼠则改用高糖高脂饲料喂养1个月后,按35mg/kg剂量腹腔内注射STZ(溶于0.1mol/L梓檬酸缓冲液,PH4.5),正常组腹腔内注射等量梓檬酸缓冲液。72小时后,测定空腹血糖≥16.7mmol/l,且出现多饮、多尿、多食现象,确认为2型糖尿病模型。大鼠造模成功后,采用分层随机法分为5组：模型组(13只)、降糖三黄片高剂量组(12只；按1575mg/kg体重给药)、降糖三黄片中剂量组(12只；按1181.25mg/kg体重给药)、降糖三黄片低剂量组(13只；按787.5mg/kg体重给药)及捷诺维组(13只；按10.5mg/kg体重给药),观察时间为6周。每周通过尾静脉采血以快速微量血糖仪测定血糖；测量饮水量及进食量；每周观测体重；定量分析舌、爪和尾的RGB值；进行抓力测定实验和旷场检测；6周后取心、肝、脾、肾、胰脏秤重,计算各脏器指数。其中DM大鼠常见证候标准值如下：气虚程度=各大鼠水平移动实测值/正常组均数×0.3+各大鼠直立次数/正常组均数×0.2+各大鼠抓力实测值/正常组均数×0.5；辨证标准：与正常组比较,>1.25为气盛, (0.75为气虚, (0.5为气虚甚, (0.25为气亏。评价热象盛衰的量化指标通常把舌R值(反映红色程度)、爪R值、尾R值作为常规热象盛衰的量化指标,各自权重分别占30%、50%、20%。阳气程度：各大鼠舌r/正常组均数×0.3+各大鼠爪r/正常组均数×0.5+各大鼠尾r/正常组均数×0.2；辨证标准：与正常组比较,>1.02为热盛, <0.95阳虚, <0.90阳亏,(0.80为阳竭。阴虚程度=各大鼠体重/正常组体重均数；辨证标准：与正常组比较,>1.2为形丰,<0.9为阴虚, (0.8为阴亏, (0.7为阴竭。胃热程度=各大鼠饮水量/正常组饮水均值×0.5+各大鼠摄食量/正常组摄食均值×0.5；辨证标准：与正常组比较,>2为胃热,>3为胃火,>4为胃火盛。使用酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测血清中6LP-1及FFA含量；使用Western-blot检测大肠和胰脏组织的GLP-1及PDX-1蛋白表达量；使用透射电镜观察糖尿病大鼠胰脏组织超微结构形态学的改变。结果：一、综合以上的大鼠饮食量、饮水量、体重、粪便粒数、尿量、空腹血糖等等安全性评价指标,可以得出结论：1、使用STZ糖尿病模型大鼠比较适合模拟临床的2型糖尿病的研究。在食量、饮水量、粪便粒数、空腹血糖、体重方面,模型组经历6周时间都没有明显改善,与正常组相比差异非常显着(P<0.01)。模型动物出现典型的“三多”症状,空腹血糖也维持较高水平,但是在体重减少这个指标上表现不明显。2、中药的高、中、低剂量组和西药组的食量、饮水量、粪便粒数、空腹血糖均较前有所减缓,但是都没有恢复到正常水平,其中以中药低剂量组和西药组改变最为明显(P<0.01)。低剂量组是临床正常使用剂量,中剂量组为临床1.5倍剂量,高剂量组为临床2倍剂量,所有观察指标均表明低剂量组疗效最好,说明中药复方存在明显量效关系,目前的临床使用量应该是最佳量效点。3、中药组的副作用比较少,西药组的降血糖效果虽然好,但是在用药第三周会有起伏,而且在体重增长方面,整个中药组的疗效都优于西药组,中药的高、中、低剂量组增长比较明显,但是西药组的体重增长却并不明显(P<0.05)。二、该模型大鼠在刚刚造模到造模第2周,主要表现为气、阳、阴两虚证,从第2周到第6周,证型基本比较稳定,表现为气阴两虚,伴胃热炽盛；在气虚、阴虚、胃热治疗方面,中药低剂量组的治疗效果比较好(P<0.01),西药组疗效不明显；在热象盛衰方面,各组均没有明显改变。三、模型组血清中FFA和GLP-1的含量相比正常组而言,有显着性差异(P(0.01),经过治疗,降糖三黄片的低剂量组与正常组的差异最为接近(P<0.05),可以明显提高GLP-1的含量,降低FFA含量。研究还发现,大肠PDX-1组,大肠GLP-1组、胰PDX-1组、胰GLP-1组当中,降糖三黄片低剂量组的GLP-1、PDX-1蛋白表达效果最佳,且与正常组相比,没有显着性差异,而高剂量组整体表现最弱。四、正常大鼠胰腺细胞可见胰岛内分泌细胞胞浆中内分泌颗粒较多,胞浆中可见线粒体,线粒体未发生空泡变性,粗面内质网也未发生病理改变,细胞核外形椭圆形,核中可见常染色质和异染色质,常染色质较多。但是模型组可以见到胰岛内分泌细胞,浆中颗粒明显减少,胞浆中线粒体肿胀明显,线粒体内嵴消失,粗面内质网也发生明显的肿胀,细胞核清晰可见,胞核外形不规则,核中常染色较多,细胞周边可见少量红细胞,血管充血明显。通过治疗,可以发现,中药三组和西药组都可以使胰岛内分泌细胞胞浆中出现大量分泌颗粒,使胞核边缘清晰可见,外形接近圆形,细胞核中可见呈块状的异染色质和淡染的常染色质,胞浆中细胞器粗面内质网和游离核糖体数量也增多。中药三组中低剂量组效果最好,而且与西药组相比,在改善胞浆中部分线粒体的肿胀现象方面,中药组的效果要好些。结论：1、综合大鼠饮食量、饮水量、体重、粪便粒数、尿量、空腹血糖等等各方面安全性评价指标,使用STZ糖尿病模型大鼠比较适合模拟临床的2型糖尿病的研究。2、在治疗效果中尽管西药组的降血糖效果最好,但存在一定副作用,中药组中低剂量组疗效最好,且整体中药组的副作用比较少。3、降糖三黄片对STZ糖尿病模型大鼠造模后第2周开始,疗效更加明显,全方益气与活血并用,增液和泻下同施正切合该模型糖尿病大鼠之气阴两虚、胃热的基本病机。4、降糖三黄片可以提高血清中GLP-1的含量,降低血清FFA含量,增加胰脏及肠道PDX-1及GLP-1的表达水平,增加胰岛素分泌、恢复或者改善β细胞功能,加快葡萄糖氧化,加速葡萄糖进入细胞内,促进肌糖原的合成,抑制糖异生等,从而纠正了糖脂代谢紊乱。5、中药复方有着良好的对抗低剂量STZ注射造成β细胞损伤,减少其凋亡和或死亡率作用,致使胰岛素／胰高血糖素分泌严重失衡现象得到抑制或者逆转,从而改善了糖、脂代谢的严重紊乱,减缓了2型糖尿病的发生和发展。