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目的1.制备双抗夹心ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附试验)嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophilia cationic protein,ECP)检测试剂盒。2.对不同的包被方法进行比较。3.评估ECP水平检测在过敏性疾病诊疗中的意义。方法1.双抗夹心ELISA ECP检测试剂盒的制备:(1)葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化抗-ECP单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),(2)过碘酸钠法HRP标记抗-ECP多克隆抗体(polyclonal antibody,pAb),(3)ELISA试剂盒的制备与条件优化,(4)实验效能评价。2.ECP检测试剂盒的方法学比较:(1)抗-ECPmAb的生物素化,(2)BSA的生物素化,(3)先包被生物素的ELISA试剂盒的制备与条件优化,(4)先包被亲和素的ELISA试剂盒的制备与条件优化,(5)比较三种检测方法。3.评估ECP水平检测对过敏性疾病诊疗的意义:(1)评估采血方式对ECP结果的影响,(2)评估ECP检测对过敏性皮肤病诊疗的意义:检测过敏性皮肤病患者血清ECP水平:检测患者总IgE水平,并评估其与ECP的相关性;评估荨麻疹患者治疗前后ECP水平的变化,以及其ECP水平与症状评分、总IgE、特异性IgE相关性;评估异位性皮炎患者疾病症状评分与ECP水平、总IgE、嗜酸性粒细胞(EOS)计数的相关性。4.评估ECP水平检测在过敏性鼻炎诊疗中的意义。结果1.双抗夹心ELISA ECP检测试剂盒的制备:(1)通过对该方法中各种反应条件的摸索和优化,确定了最适工作条件:单抗最适包被浓度1:500稀释,酶标多抗最适浓度为1:8000稀释,最佳封闭液为1%的BSA,最适血清稀释液为稀释液Ⅱ,最佳反应时间为60min,反应温度为37℃。(2)本研究制备的试剂盒线性范围为2.5～200ng/ml,灵敏度为2.75ng/ml,相对偏差为11.5%,批内变异系数＜10%,批间变异系数＜15%,稳定性较好,与ADL试剂盒相比较相关系数为0.97。2.三种方法的比较:(1)生物素亲和素包被法线性范围为2.5～500ng/ml,灵敏度为2.61ng/ml,相对偏差为10.9%;(2)亲和素包被法线性范围为2.5～500ng/ml,灵敏度为2.68ng/ml,相对偏差为11.9%。(3)三种方法的重复性、精确性没有显著性差异,稳定性亲和素包被法最为稳定,抗体包被法次之,生物素包被法最不稳定,抗体直接包被法操作最为简易,但抗体用量最多。3.ECP水平检测对过敏性疾病诊疗的意义:(1)标本采集后37℃放置1h的结果显著高于室温与0℃组,抗凝剂对ECP水平无影响,而标本溶血使ECP水平显著升高。(2)过敏性皮肤