不同百合AGPase基因的克隆与表达分析

来源 :云南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ufo747
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
百合(Lilium spp.)是百合科百合属植物,其品种广泛应用于花卉产业,部分百合的鳞茎目前也开发为食品及药品,具有很高的经济价值。食用百合以鳞茎为食材;切花百合的开花早晚与开花数量也与鳞茎的大小相关,故百合鳞茎膨大极具研究价值。鳞茎种球的膨大主要依靠淀粉的累积,从生物淀粉合成代谢的角度来看,了解淀粉合成相关酶的基因及其表达模式、分析各个因素与淀粉含量之间的相关性,以得到影响淀粉合成的关键因素,为百合种球快速繁殖提供分子基础,且AGPase小亚基基因与淀粉合成及淀粉含量正相关,可作为百合筛选高淀粉含量种质的标记,为快速鉴定百合新品种提供新途径,这也对百合的种球生产具有积极的意义。本研究对亚洲百合川百合(Lilium davidii),东方百合‘白佩琪’,铁炮百合‘萨利’三类百合的大棚生长发育过程中的不同时期进行了淀粉含量以及淀粉合成限速酶AGPase酶活性的测定;对AGPase的三个亚基基因进行了克隆;采用q PCR对AGPase三个亚基基因的表达量进行测定并对其表达模式进行了分析;借助R语言进行皮尔逊相关性分析并得到相关性情况;最后进行了内参基因的筛选。主要结果如下:1.鳞茎淀粉含量测定的结果表明,三类百合都在倒苗期淀粉含量最高,川百合为209 mg/g、‘白佩琪’为184 mg/g、‘萨利’为151 mg/g;在花期淀粉含量最低,川百合为100 mg/g、‘白佩琪’为127 mg/g、‘萨利’为66 mg/g。同一时期(花期)不同组织的淀粉含量结果表明,叶片中淀粉含量远低于鳞片,花期时川百合、‘白佩琪’、‘萨利’的叶片淀粉含量分别为33 mg/g、47 mg/g、11 mg/g。同一时期(花期)不同组织的AGPase酶活性结果表明叶片中AGPase酶活性远高于鳞片,此时期川百合、‘白佩琪’、‘萨利’的叶片酶活性分别为475 U/g、984 U/g、407 U/g;而此时期鳞片的酶活仅分别为5 U/g、4 U/g;7 U/g。在鳞片的不同发育阶段,不同类型百合的酶活性变化趋势与淀粉含量变化趋势是相似的,花期最低,倒苗期最高。倒苗期川百合、‘白佩琪’、‘萨利’的鳞片酶活性分别为29 U/g、32 U/g;35 U/g。2.克隆得到三类百合每类3个AGPase的亚基基因序列。结构预测的结果说明克隆的基因表达后构成的蛋白在结构上都与同一个AGPase相似;保守结构域功能预测说明克隆的基因表达后构成的蛋白执行淀粉合成相关分子功能及糖原合成相关生物学功能。系统进化的结果显示两个大亚基与浙贝母的进化距离很近,且小亚基的进化树中,本次克隆得到的AGPS序列与浙贝母和已经报道的7种百合的进化距离均很近,由此可以推测AGP基因可能在百合科植物间都具有较高的保守性。3.表达性分析结果表明大亚基在不同百合中表达趋势总体是相似的。AGPL1在三类百合中都是花期达到最高的表达量且出苗期和倒苗期表达量相差不大,但是在不同百合中,具体的表达水平有较大的差异,川百合中,花期表达量是出苗期的2.5倍左右,‘白佩琪’中花期约为出苗期的2倍左右,但是在‘萨利’中,其花期表达量为出苗期的近10倍;AGPL2在‘萨利’和川百合中三个时期表达几无差异,但是在‘白佩琪’中呈现为花期表达约为出苗期的7倍,倒苗期约为出苗期的4倍。小亚基在三类百合中的表达趋势都相似,且表达水平在三类百合中差异也不大。4.内参基因的筛选分别得到了三类百合各自不同组织(花期鳞片及花期叶片);不同发育阶段(出苗期,花期,倒苗期)以及综合最稳定的内参基因。所有样品、不同发育阶段、不同组织的鳞茎内参基因都是BHLH和ACT综合稳定性最佳。此外,也得到了不同百合间不同组织,不同发育阶段以及综合因素的最稳定内参基因。‘萨利’所有样品和不同发育阶段的鳞茎都是EIF和BHLH综合稳定性最佳,不同组织间GAPDH和EIF的稳定性最佳。川百合所有样品和不同发育阶段的鳞茎都是BHLH和GAPDH综合稳定性最佳,不同组织间GAPDH和EIF的稳定性最佳。‘白佩琪’所有样品的鳞茎为EIF和ACT综合稳定性最佳,不同发育阶段为BHLH和EIF综合稳定性最佳,不同组织间EIF和ACT的稳定性最佳。所得的结果可以细致的指导后续所需的定量实验。5.鳞茎所测数据的相关性分析的结果表明鳞茎的淀粉含量与AGPase酶活性及AGPS基因表达量高度线性正相关,相关系数分别为0.87及0.73,且数据之间存在显著性差异;此外,小亚基基因AGPS与酶活性也呈现出高度线性正相关,相关系数为0.89,数据之间也存在显著性差异,即AGPase小亚基基因的表达量与百合淀粉含量及酶活性都表现出正相关,说明小亚基基因是影响AGPase活性及淀粉合成的关键因子。叶片所测数据的相关性分析表明,叶片中3个AGPase基因之间都高度线性正相关,相关系数分别为0.82,0.80,0.87,这与鳞片中的三个基因的相关性模式不同,说明这三个基因在叶片中与在鳞片中可能存在不同的协同表达模式,故推测百合AGPase不同亚基基因也存在组织特异性表达。所得结果的分析为百合中后续AGPase的相关研究提供了可重点着眼于小亚基基因表达、大小亚基表达量差异及二者的相互作用的思路;也为鳞茎的繁育提供了可通过过表达或基因编辑等技术调节淀粉合成限速酶小亚基基因表达及调节其酶活性以促进百合鳞茎膨大的实践思路。
其他文献
一直以来,我国的宅基地制度秉承社会主义公有制制度进行的制度设计。在宅基地制度产生之初,为了保护农民住有所居的权利,宅基地制度一向以社会保障性与福利性为原则。经历了一元所有制向两权分离阶段的转变后,集体享有所有权,农户无偿享有宅基地使用权。这样的制度设计对保障农户的居住权起着积极的意义。但是无偿意味着限制,宅基地使用权有着禁止向集体外人员转让、不能抵押等诸多限制。随着我国城市化进程的加快,社会的发展
学位
Festivals play significant role in development of tourism.Festivals occupy a special place with cultural values,associate with the large crowd,creative activities and emotional response of locals and
学位
随着城镇化的快速推进,城市已经成为人们生活的主要场所。城市城镇化承载能力是有限度的,其承载能力的有限性决定了城市的城镇化承载力有一个阈值。产业结构是协调城市资源、环境和经济等要素的重要枢纽,产业的良性发展,有利于为城镇化承载力的提高提供资金来源。产业发展与城镇化承载力之间有深入的联系,城镇化承载力是产业发展的基础,产业发展又是城镇化承载力提升的动力,产业发展与城镇化承载力协调发展是促进城市经济社会
学位
21世纪以来,城市防灾形势日益严峻,社区作为城市的基础单元,其防灾地位凸显。而作为社区安全的薄弱环节之一,老旧社区的防灾形势不容乐观,提高老旧社区防灾韧性显得尤为迫切。目前针对老旧社区的灾害韧性研究相对较少,已有研究多集中于老旧社区设施硬件因素,对管理等“软”性因素关注较少。本文在综合防灾视角下对老旧社区韧性进行评价研究的基础上,总结分析老旧社区防灾韧性治理提升策略,旨在强调“软”性因素在老旧社区
学位
香蕉果实食用与药用价值高,富含多种生物活性成分,目前对于香蕉功能性食品的开发利用已引起人们极大关注。香蕉果皮约占果实重量的40%,常被当作废弃物造成环境污染,但其本身含有大量活性物质,因此香蕉果皮具有极高的回收和再利用价值。虽然目前国内外对于香蕉中活性成分已有了较为深入的研究,但是至今尚无综合对不同基因组型、基因型、产地和成熟度香蕉果肉和果皮生物活性成分全面的分析报道。鉴于此,本研究以从国际生物多
学位
开远木棉(G.barbadense)属海岛棉,来自云南开远地区的地方品种。其株型高大紧凑,花、叶、果均具观赏性,已被云南少数民族用于庭院观赏。开远木棉还具有很强的抗性及适应性,生长速度快,在观赏园林领域具有发展前景。开远木棉的叶巨大、光亮、不易落叶、但叶色仅为单一的翠绿色,影响其在园林市场里的竞争力。因此,实现开远木棉叶色多样化是提升其观赏价值的有效途径。本论文以开远木棉为研究材料,利用传统杂交育
学位
杂种优势是全世界共同关注的热点,然而杂种优势形成的遗传机理还不清楚。玉米是最早利用杂种优势大幅度增加产量的作物,但至今在理论上并未取得实质性突破。热带玉米与温带玉米间遗传差异显著,但二者间产量性状杂种优势的QTL定位尚未见文献报道。基于课题组前期利用热带材料Y46与温带材料Y107组建的RIL群体,本研究构建了两个BC1F7:8高代回交群体,通过GBS(Genotyping By Sequenci
学位
随着信息技术的发展,教育教学领域也逐渐强调信息化教学模式的变革。本文以中职烹饪教学为例,分析信息化教学在中职烹饪教学中的应用与实践。从理论依据开始,进一步分析信息化教学的应用优势与注意事项,提出应用与实践对策,希望能够有效促使学生感受烹饪课堂的魅力,激发学生对烹饪知识学习的热情和兴趣,推动中职烹饪教学模式的创新。
期刊
目的:通过对国内外医疗保险制度的比较可以获取国外医疗保险的优秀发展经验,以改善我国现行基本医疗保险制度的不足。通过评估现行基本医疗保险制度对居民健康的改善效果及作用机制,以厘清“健康中国”推进过程中基本医疗保险制度改良的重点内容。方法:本文通过横向对比国内外医疗保险制度的运行机制,以及纵向了解我国医疗保险制度的发展历史考察我国现行医疗保险制度的不足。本文选用“中国家庭追踪调查”中2016年及201
学位
随着海洋运输业,海洋国防战略的发展,实现海上作业的安全性与有效性是发展海上作业的关键。刚柔混合三维补偿装置,作为一种运动的补偿机构,在货物的补给过程中,控制货物的运动,消除风浪引起的船舶之间相对运动对货物补给的影响。根据目前国内外波浪补偿装置中存在的问题,将刚柔混合并联机构运用到波浪补偿装置中。本文以基于绳牵引刚柔混合并联机构为研究对象,根据补偿运动的需要,创新设计了绳牵引刚柔混合驱动波浪补偿并联
学位