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目的:(1)检测肝癌患者血浆中tp53诱导的糖酵解和凋亡调节蛋白(TIGAR)含量与对照组血浆TIGAR含量的差异。(2)检测肝癌组织与癌旁组织中TIGAR及磷酸果糖激酶-3(PFKFB3)表达的含量差异,以及TIGAR与PFKFB3在肝癌组织与癌旁组织表达的关联性。(3)检测肝癌组织与癌旁组织中TIGAR及血管内皮标记物(CD31)的含量差异,以及TIGAR与CD31在肝癌组织与癌旁组织表达的关联性。(4)检测肝癌组织与癌旁组织糖原代谢及活性氧(ROS)含量的差异。(5)探讨TIGAR在肝癌临床应用中的价值。方法:收集2019年11月至2020年11月在厦门大学附属第一医院肝胆胰血管外科行手术治疗的50例肝脏占位患者病历资料,在告知并取得患者及家属同意的情况下分别收集患者术前血液标本、肝癌组织及癌旁组织标本。(1)肝癌患者及健康人(对照组)血浆中TIGAR的含量使用酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定;采用组织蛋白质电泳与western blot分析和组织实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)来从蛋白水平以及mRNA水平测定肝癌组织及癌旁组织中TIGAR及PFKFB3表达的差异并将两者进行关联性分析;用免疫荧光双重染色观察肝癌组织与癌旁组织中TIGAR及CD31的定位关联性,并通过计算荧光强度来对比两者在肝癌组织与癌旁组织间的表达差异。(2)分别用HE染色和糖原PAS染色来观察肝癌组织与癌旁组织中形态学及糖原代谢的差异;用ELISA法测定癌组织及癌旁组织中ROS的含量差异。(3)结合患者临床数据分析TIGAR在患者不同临床特征、病理特征、肿瘤特征间的差异及与临床实验室检验指标的相关性,分析TIGAR在临床应用中的价值。结果:(1)肝癌患者血浆中的TIGAR含量相比于对照组(健康人)来说,显著增高(P<0.0001)。复发患者的TIGAR血浆表达高于无复发患者(P<0.05);血浆TIGAR诊断肝癌复发的曲线下面积(ROC-AUC)为0.802(P<0.0001),灵敏度为100%,特异性为60.47%;AFP诊断肝癌复发的ROC-AUC为0.547(P=0.7266),灵敏度为83.33%,特异性为39.53%;两者曲线下面积之差为0.255;血浆TIGAR与AFP联合诊断肝癌复发的ROC-AUC为0.826,高于TIGAR单独诊断肝癌复发,也高于AFP单独诊断(P<0.0001)。(2)TIGAR的相对蛋白表达显示,肝癌组织高于癌旁组织(P<0.0001);PFKFB3的相对蛋白表达在癌组织中略高于癌旁组织,差异无统计学意义(P>0.05);TIGAR与PFKFB3之间未发现相关联系(P>0.05)。患者RBC、Ki67、APF、PIVKA水平与TIGAR蛋白表达水平呈现正相关(P<0.05);HBV感染相关的肝癌患者TIGAR蛋白水平明显高于无HBV相关感染的患者;肝细胞癌(HCC)患者TIGAR蛋白水平高于非肝细胞癌的患者;术前进行转化治疗的患者TIGAR蛋白水平低于未进行转化治疗的患者,差异皆有统计学意义(P<0.05)。(3)实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)结果显示,TIGAR在mRNA水平的表达,相比较于癌旁组织,癌组织更低,差异并无统计学意义(P>0.05);PFKFB3在mRNA水平的表达显示,癌旁组织表达明显高于癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);TIGAR与PFKFB3两者间mRNA表达水平无相关性(P>0.05)。(4)通过免疫荧光染色双染TIGAR和CD31,观察荧光强度对比后发现,癌组织染色的TIGAR荧光强度88%高于癌旁;通过Image J软件计算荧光强度后结果显示,TIGAR在癌组织中的平均荧光强度较癌旁组织平均荧光强度来说较高(P<0.0001);CD31在癌组织的平均荧光强度也高于癌旁组织(P<0.0001),未发现TIGAR与CD31之间的相关性联系(P>0.05)。(5)肝癌组织与癌旁组织在形态结构上有较大差异,癌组织中肝小叶结构破坏,异形细胞大量增殖,肝细胞形态多样化,大量细胞核处于固缩和碎裂状态,其中可见小血管及小胆管增生明显多于癌旁组织,偶可见团块状癌巢出现;癌旁组织中肝小叶结构完整,偶可见到完整的门管区结构,内有小叶间动静脉及胆管;也可见到中央静脉结构,肝血窦以其为中心放射状排列;肝细胞核大而圆,可见双核细胞。通过糖原PAS染色观察到,其中95%肝癌组织的糖原沉淀浓度低于癌旁组织,且分布皆无规律;癌旁组织中糖原沉淀多位于肝细胞质内,聚集状排列;从组织匀浆液ROS测定中可以看出,肝癌癌旁组织中的ROS含量高于癌组织(P<0.05)。结论:1.肝癌组血浆中TIGAR水平比对照组高,肝癌组织中TIGAR蛋白水平也高于癌旁组织,说明TIGAR可能与肝癌的发生发展有很大的关系。2.复发患者TIGAR血浆水平显著高于无复发患者,TIGAR血浆水平可视为肝癌术后复发的危险因素评估指标之一。3.血浆TIGAR可以联合AFP提高肝癌的复发诊断率,还需进一步研究,日后有望成为诊断肝癌复发的标志物。4.在原发性肝癌中,HCC与TIGAR的表达关系可能更为密切。5.TIGAR可能影响了肝脏糖原代谢,同时也影响了 ROS在肝脏中的含量。