【摘 要】
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Fes1A是HSP70的辅助分子伴侣,敲除Fes1A,拟南芥呈现热敏感表型。与fes1a相比,atg7 fes1a双突变热敏感性降低。本研究中,作者分析了热胁迫后atg7fes1a双突变和fes1a单突变的下胚轴再生长情况,结果表明突变ATG7可以降低fes1a的热敏感性。Western-blotting分析表明atg7 fes1a双突变和fes1a单突变中HSP70和HSP101的表达量没有差异
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Fes1A是HSP70的辅助分子伴侣,敲除Fes1A,拟南芥呈现热敏感表型。与fes1a相比,atg7 fes1a双突变热敏感性降低。本研究中,作者分析了热胁迫后atg7fes1a双突变和fes1a单突变的下胚轴再生长情况,结果表明突变ATG7可以降低fes1a的热敏感性。Western-blotting分析表明atg7 fes1a双突变和fes1a单突变中HSP70和HSP101的表达量没有差异。atg7 fes1a双突变和fes1a单突变之间的热变性荧光素酶的复性速度也没有差异。为进一步证明atg7 fes1a双突变热敏感性低的原因,我们育成了atg7 hot1双突变,发现atg7 hot1双突变和hot1单突变之间的热敏感性没有差异。基于对atg7 fes1a双突变和fes1a单突变转录组差异表达基因的分析,作者发现在atg7fes1a双突变中有两个IAA合成相关基因显著上调,这两个基因分别为编码醛氧化酶基因(AAO1)和吲哚乙腈水解酶基因(NIT2),前者在IPA途径中将吲哚乙醛(IAD)氧化成吲哚乙酸(IAA),而后者在IAOX途径中将吲哚乙腈(IAN)水解成吲哚乙酸(IAA)。作者通过施加外源的IAA对atg7 fes1a双突变和fes1a单突变的获得耐热性进行了检测,结果发现IAA降低了atg7 fes1a双突变和fes1a单突变的热敏感性。简而言之,突变ATG7后,IAA合成途径中AAO1和NIT2的上调可能与atg7 fes1a双突变比fes1a单突变热敏感性降低有关,同时揭示了IAA可以影响植物的耐热性以及细胞自噬与IAA的合成有关。Fes1A和Brf2两个基因之间存在共转录现象。在本研究中,作者构建了Pro Fes1A-Fes1Agenomic-Space-Brf25’UTR-GUS的p BI121重组载体并转化fes1a,获得了纯合转基因株系进行了获得耐热性表型分析,结果发现fes1a的热敏感性缺陷由于Fes1A的表达得到了修复,通过组织化学染色和Western-blotting发现GUS和Fes1A都是受高温诱导表达的。作者通过RT-PCR扩增到包括Fes1A c DNA、基因间隔区(Space)以及GUS c DNA的长约3400bp的全长共转录本。为了证明Fes1A和Brf2之间的间隔区是否有启动子活性,作者构建Space-GUS的p BI101重组载体并转化拟南芥,组织化学染色结果表明间隔区没有启动子活性。以上结果均支持Fes1A和Brf2两个基因之间存在共转录现象的这一结论,揭示了植物中存在共转录现象。
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